鸡α干扰素的原核表达及其抗病毒效果研究

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[目的]研究原核表达的鸡α干扰素的抗病毒效果,为原核表达的鸡a干扰素的临床应用奠定基础。[方法]①采用RT-PCR技术,从鸡脾脏总RNA中扩增出鸡α干扰素全长基因(Ch1FN-α)和去信号肽序列的成熟蛋白基因(Ch1FN-α’).②将Ch1FN-α与表达载体pET-32a连接,构建重组表达质粒pET-32a-ChIFN-α’,然后转化到感受态细胞BL21中诱导表达,对表达产物鸡a干扰素变性、纯化、复性并测浓度。③采用细胞病变抑制法,在鸡胚成纤维(CEF)细胞上测定鸡α干扰素对鸡痘病毒的抗病毒活性;通过鸡胚实验,注射不同剂量的鸡α干扰素,研究其对肾型传染性支气管炎病毒的抑制效果。[结果]①扩增出Ch1FN-α和Ch1FN-α’分别为582bp和489bp, DNA测序结果与NCBI中鸡α干扰素的基因对比,同源性分别为100%和99.8%,说明克隆成功;②测序表明成功构建出pET-32a-ChIFN-α重组表达质粒,诱导表达产物蛋白分子量约为36kD,与预期相符,经变性、Ni2+-NTA亲和层析纯化,递度透析复性后测得表达蛋白的浓度为285μg/mL;②研究表明:表达蛋白在鸡胚成纤维(CEF)细胞上抗鸡痘病毒活性为1.34×104U/mg;通过鸡胚实验,注入1μg表达蛋白组的鸡胚全部死亡,3μg组鸡胚存活率在80%,而9μg和27μg组鸡胚生长良好。[结论]重组鸡α干扰素对鸡痘病毒和鸡肾型传染性支气管炎病毒都有显著的抗病毒效果。
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