褐飞虱Hairy基因的克隆及其功能研究

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褐飞虱是水稻生产上的重要迁飞性害虫,其严重影响我国及东南亚国家水稻的产量和质量。保幼激素和蜕皮激素在褐飞虱的生长发育中具有十分重要的作用,两种激素在体内分别通过各自的受体蛋白及相应的信号传递途径调节下游基因的表达,进而影响褐飞虱的生长发育。Hairy(Hry)基因为保幼激素及其受体Methoprene-tolerant(Met)调控的下游基因。本论文首先从褐飞虱中克隆得到Hairy基因,并进行了生物信息学分析,发现根据其碱基序列预测得到的蛋白质序列存在保守的basic Helix-Loop-Helix(bHLH)结构域,Orange区域和WRPW区域。利用荧光定量PCR研究Hairy在褐飞虱体内的时空表达特性,发现该基因在卵与翅膀及足中的表达量相对较高。通过RNA干扰实验发现,Hairy与激素信号传导途径密切相关,对褐飞虱的存活、蜕皮、生殖器和翅膀的发育以及卵巢的发育都有显著影响。下调Hairy基因的表达,在一定程度上降低了存活率,提高了蜕皮过程中的死亡率,造成了生殖器和翅膀的畸形发育,以及卵巢的畸形发育。此外,通过免疫共沉淀实验发现Hairy蛋白分别与两种激素信号途径下游的关键转录因子r ppel-homologue 1(r-h1)和E93,及保幼激素受体Met,均存在蛋白-蛋白相互作用,进一步通过免疫荧光进行细胞定位发现Hry与r-h1,E93和Met共定位。最后,对RNAi后的褐飞虱进行转录组测序并用定量PCR验证,发现Hairy调控糖酵解途径中的相关基因和表皮蛋白基因的表达。本研究不仅有利于我们理解保幼激素和蜕皮激素信号途径,也为发现新型生物农药靶标提供基础。
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