【摘 要】
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该系列研究利用基因打靶技术建立hsp86基因缺失的恶性疟原虫缺陷虫株模型,为进一步对恶性疟原虫HSP86蛋白功能及其与其它蛋白质间的相互作用,恶性疟原虫细胞信号转导中的意义
【出 处】
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中山医科大学 中山大学中山医学院 中山大学
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该系列研究利用基因打靶技术建立hsp86基因缺失的恶性疟原虫缺陷虫株模型,为进一步对恶性疟原虫HSP86蛋白功能及其与其它蛋白质间的相互作用,恶性疟原虫细胞信号转导中的意义进行深入研究提供实验基础.该实验首先构建用于在恶性疟原虫细胞内进行基因打靶的载体,从恶性疟原虫基因组中扩增出hsp86基因的外显子部分序列,构建成插入型和置 换型打靶载体,同时,进行恶性疟原虫红内期的体外连续培养,待培养条件稳定之后,将恶性疟原虫用5﹪山梨醇处理使之生长同步化,然后对处于环状体期的恶性疟原虫进行电穿孔 转染,将打靶载体转入恶性疟原虫体内.同时,为观察转染效率和外源基因在恶性疟原虫中表达情况,设计并构建用于在恶性疟原虫内瞬时表达的表达载体pHC-GFPM2,GFPM2为绿色荧光蛋白基因的突变体,该基因的表达产物为绿色荧光蛋白,可在紫外光的激发下发出明亮的绿色荧光,借助荧光显微镜可以观察转入的外源基因的表达情况和电穿孔转染效率.由于疟原虫为单细胞生物,同时红内期恶性疟原虫染色体为单倍体,因此筛选并鉴定出的虫株即为恶性疟原虫hsp86基因缺失的抗性克隆.该实验为进一步对恶性疟原虫hsp86基因的功能及其与其它基因和基因产物间关系的深入研究奠定了物质基础,为进一步对其它疟原虫基因功能的研究开辟了一条新的实验路线.
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