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膜蛋白(特别是膜内在蛋白)在生物体与外界环境进行物质和能量的交换以及信号传递等方面起着非常重要的作用。各种不同的质膜蛋白在生物膜上以通道蛋白或载体蛋白等形式存在,是维持体内稳定内环境的重要通道。它们不仅是调节细胞新陈代谢的重要参与者,而且在电子传递链中也有着重要的作用。膜蛋白约占细胞总蛋白的1/3左右,并且大部分膜蛋白是研究新药的潜在靶点,是新药研发的重要领域之一。
天然内膜蛋白存在于生物膜的脂类环境中,大多为疏水性的蛋白,应用常规蛋白纯化方法难以将其纯化。本文以家蚕杆状病毒感染的蚕蛹为材料,通过感染初期病毒出芽将宿主细胞的细胞膜剥离产生囊膜病毒,经过匀浆、差速离心、密度梯度离心获得带囊膜病毒后,利用高压破碎和超速离心等一系列技术手段而获得较纯的膜结构后,采用两性离子去垢剂(CHAPS)提取膜蛋白,利用AKTAexplorer10蛋白纯化系统进行离子交换层析和凝胶过滤层析来分离家蚕膜蛋白,获得的蛋白样品经过双向电泳进一步分离后,通过MAIDI-TOF-MS获得一种家蚕膜蛋白的肽质量指纹图谱(Peptide Mass Fingerprinting,PMF),利用PLGS Browser软件搜索家蚕蛋白质理论数据库来分析鉴定纯化的蛋白。经过质谱鉴定证实我们获得了一个具有一次跨膜的家蚕膜蛋白,为西南农大蛋白库编号Bmb019518蛋白。利用病毒出芽方式获得纯的宿主细胞膜的方法是一次全新的尝试,这为研究膜蛋白提供了一个有效的膜蛋白分离技术,并为进一步研究膜蛋白的结构和功能奠定基础。