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随着免疫学的发展和免疫机制在白血病发生发展中作用的逐步阐明,免疫学技术、方法和原理在白血病诊疗中发挥越来越重要的作用。本文对抗白血病肿瘤疫苗和新型白细胞介素在造血系统中的作用进行了若干探索,取得了新的进展。第一部分:小鼠β-防御素2瘤苗的构建及抗白血病L1210作用的研究 天然免疫一度被认为只是免疫系统应答外界刺激的低级形式,近年研究发现天然免疫对获得性免疫起直接的激活和导向作用。天然免疫通过模式识别受体(PRR)作用赋予获得性免疫识别“自己”和“非己”的能力。最近研究发现天然免疫抗菌肽小鼠β-防御素2(MBD2)不仅能够趋化不成熟树突状细胞(iDC),还可通过PRR激活DC成熟,产生一系列前炎症细胞因子、趋化因子,上调共刺激分子,可能是连接天然免疫和获得性免疫的桥梁。我们将MBD2转染小鼠淋巴细胞白血病L1210细胞,制备细胞瘤苗观察其抗白血病免疫效果。首先用RT-PCR法从LPS刺激的小鼠皮肤细胞克隆MBD2成熟部分基因片断,用overlap PCR法将小鼠IgK信号肽与MBD2成熟片断相连,构建MBD2分泌表达载体(pMBD2),经测序证实序列正确后,脂质体法将空载体及pMBD2分别转染L1210细胞,获得稳定表达细胞系(分别命名为L1210—p和L1210一MBD2)。Western blot证实转染的肿瘤疫苗细胞可以表达并分泌MBD2。用TransweⅡ检测瘤苗细胞培养上清对不成熟DC迁移的作用,证实瘤苗细胞表达的MBD2有功能活性。生长曲线和细胞周期实验证实与未转染的肿瘤细胞相比,转染空载体和pMBD2对肿瘤细胞生长增殖无明显影响。FACS检测MHCI(H-2K~d,H-2D~d),MHC Ⅱ(I-A~d)分子,共刺激分子CD80、CD86表达发现,与未转染的L1210细胞相比,转染空载体或pMBD2后,L1210细胞上述分子的表达亦无明显改变。随后进行小鼠体内抗白血病效果评价。体内致瘤性实验和免疫保护实验结果显示,L1210—MBD2瘤苗能显著降低L1210细胞的致瘤