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妊娠期糖耐量受损是每一个孕妇都将面临的问题,这可以导致多种母儿疾病的发生。大量的研究结果表明,妊娠期妇女糖代谢异常与胰岛素抵抗(IR)密切相关。现已证实,胰岛素受体底物家族(IRSs)、磷脂酰激醇激酶、葡萄糖转运蛋白家族(GLUTs)以及核受体等是细胞内参与和调节糖代谢的关键蛋白(或酶)分子。本课题通过对妊娠特有的滋养细胞糖代谢进行研究,用中药提取成分—小檗碱、薯蓣皂甙进行干预,探讨滋养细胞内糖代谢相关蛋白分子的表达变化和药物的调节作用,同时研究滋养细胞糖代谢障碍对激素分泌的影响。方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)对相关分子的基因表达进行分析;免疫蛋白印迹(Western blot)对蛋白表达进行检测;免疫细胞化学结合激光共聚焦技术进行分子细胞内定位;胎盘激素分泌水平的测定利用放免法或化学发光法。试验结果:1.Wortmaninn诱导的滋养细胞~3H-D-葡萄糖参入率低于空白组细胞,P<0.05;上清剩余糖量对比模型组高于空白组P<0.05;RT-PCR检测诱导后P110βmRNA表达下降90.2%。2.Wortmaninn阻断后IRS-1,PI-3K(P85),PPARγ的mRNA表达下调。3.小檗碱可以明显提高IRS-1、P85、PPARγmRNA表达,对IRS-1和PPARγ的调节与曲格列酮相似,药物干预前后分别增加23.94%,113.9%;在P85的调节上明显优于其它组药物,mRNA上调64.41%;薯蓣皂甙对P85和PPARγ有一定的上调作用,分别为17.91%,10.57%。蛋白表达与mRNA表达趋势相同,但调控水平不显著;IRS-1分布于细胞浆中,中等表达、GLUT1分布于细胞浆中和胞膜上,表达量较少;PParγ分布于核膜上,表达量较少。4.MLN64mRNA的表达:WT组与正常细胞组对比,表达下降26.91%(0.326/0.446),B、T组与WT组相比其表达明显上调,分别为:69.93%(0.554/0.326)、53.98%(0.502/0.326);胎盘激素分泌变化:T组与WT组相比,E2和P的含量明显升高,P<0.05,其它药物对激素分泌的影响不显著。综上研究结果表明:1.Wortmaninn可以诱导滋养细胞对葡萄糖的摄取和利用异常,建立细胞糖代谢障碍模型。滋养细胞内可能存在与胰岛素信号转导相类似的途径参与细胞的糖代谢。2.小檗碱对多种糖代谢相关蛋白因子有调控作用,这可能是改善糖代谢障碍的细胞内分子机制,在某些方面的作用效果与曲格列酮、二甲双胍相近。3.薯蓣皂甙对滋养细胞糖代谢的调节作用不显著。4.滋养细胞糖代谢障碍使MLN64mRNA表达下降,可能影响甾体激素合成的限素步骤。小檗碱和曲格列酮能上调其表达,且作用相当。5.除曲格列酮外其他药物对胎盘激素分泌的影响不显著。