前言 近年来研究发现粘附分子的变化与梗阻性黄疸术后感染和多脏器损害等并发症密切相关。因此明确细胞粘附分子在梗阻性黄疸时的损伤机理及如何减轻其损害对临床围手术期处理有重要意义。 细胞粘附分子是一类介导细胞间粘附的膜表面糖蛋白，在炎症反应、免疫应答等多种生理、病理过程中发挥重要作用。其中细胞间粘附分子-1(ICAM-1)在炎症反应及细胞损害中起着重要作用，是白细胞(PMN)活化的标志。目前的研究表明：梗阻性黄疸时细胞粘附分子的致损伤作用是通过激活的枯否细胞释放TNF、IL-1和INF诱导ICAM—1表达增强，诱使促进大量的PMN在肝窦及其他有内皮细胞损伤的组织中聚集，释放炎性介质引起组织损伤。因此抗粘附治疗有可能减轻各脏器损害，但是目前无确切及有效的方法。 近年生长激素(growth hormone GH)在梗阻性黄疸时作用已引起学者们的关注。我们的前期研究表明GH通过改善梗阻性黄疸时大鼠的肠粘膜机械屏障降低了血浆内毒素和TNF水平，似可改善预后，但其对梗阻性黄疸时细胞粘附分子的表达是否有影响及机制国内外未见报道，有待进一步探讨。 本研究通过建立梗阻性黄疸的大鼠动物模型，探讨人重组生长激素对ICAM-1表达的影响及机理，并为临床减轻梗阻性黄疸围手术期感染及多器官损害进行实验性探索。 实验材料与方法 1．实验材料 1）实验动物：雄性成年Wistar大鼠，45只，体重300－350克。 2）实验器材：鼠固定手术台全自动生化分析仪olylnpSS光学显微镜手术器械及麻醉药品 3）实验试剂：ICAM－l免疫组化染色试剂盒（上海中山生物技术有限公司）瑞士雪兰诺药厂Saizen人重组生长激素。 2．实验方法 ＊将45只大鼠喂养7天，适应环境并进行检疫。 2）将45只鼠随机分成三组 A假手术组 B梗黄组 C生长激素干扰组。 每组15只进行标记加以区分。 3）每次实验各组只数一致以防组间差异。 4）手术： A术前禁食12小时，自由饮水。 B 2％戊巴比妥 4．5毫议100克腹腔内注射麻醉。 C固定大鼠于手术台上，术区备皮，消毒。 D上腹正中切口进腹，将肝脏向外拉开，暴露肝十二指肠韧带，（假手术组仅分离肝十H指肠韧带而不结扎胆管，实验组仅十C组万0只大鼠分离出胆总管5—0丝线结扎。 E仔细缝合关腹。 5）术后24小时自由进水，进食，自由活动。 6）术后第三周始C组双后肢内侧皮下注射rhGHO．75in／1009／组B组相同部位注射等量生理盐水。 7）实验三周后再次麻醉，严格无菌条件下打开腹腔，抽取门静脉血置于试管中待测；取部分肝组织作常规石蜡切片。 8）常规HE染色。 9）ICAM—l免疫组化染色切片自然风干后加 3％H尸。作用10分钟；100MI／L非免疫血清阻断10分钟；抗一ICAM—l门： ·2·400V℃过夜；生物素标记的第二抗体，37℃二小时；链霉菌抗生素蛋白一碱性磷酸酶溶液37℃3o分钟；厂BT／BOP显色，光镜下见棕色颗粒为阳性，蒸馏水漂洗；双重染色增强刑，37℃30分钟；对照设置：O）两种第一抗体均不加；p）只加一种第一抗体。 10）检测指标无着色为一，少于 10％为十，10％－50％为十十，＞50院为十十十。 实验结果 梗黄组及生长激素干扰组的大鼠一周左右出现全身黄染，尿色深黄；胆管结扎三周后终止实验，开腹见胆管结扎段以上极度扩张，管壁菲薄。然后抽血测胆红素，结果符合梗阻性黄疽，模型成功建立。 检测肝功结果：白蛋白（＊＊B）＊O组25．0二。＊枯g／L，OJ组20．53 t 2．59吵L，OJ＋hGH组 23．27 ti．98叭；谷丙转氨酶（ALT＊O组20．07 is．98IU／L刀J组 174．67 t31．19IU／L，OJ＋hGH组 120．00 z ZI．gllU／L，总胆红素（TBIL）SO组 6．14。l·84wmoyL，OJ＋rhGH组 155·73。22．46pmoUL；直接胆红素（＊mL）＊ 组4．38土1．33卜mo＊L，叶组1扬．73土Zo．66pmo＊L，OJ＋rhGH组 129．27 t 22．78 pmWL。 肝脏形态学改变：大体标本见OJ组和rhGH干扰组大鼠的肝脏肿胀＼无光泽、质硬、秽暗。光镜见：梗黄组大鼠肝细胞局灶性坏死，有炎性细胞（中性粒细胞及淋巴细胞）浸润在汇管区及间质，有大量淋巴细胞浸润在血管周围，血管扩张充血；纤维组织带增宽，肝脏结构改变明显。生长激素干扰组的大鼠HE染色的组织形态学改变较梗黄组大鼠明显减轻。 大鼠肝细胞内ICAM一二表达结果：对照组阳性细胞表达少，梗黄组表达明显增加，梗阻性黄疽组较对照组大鼠的ICAM一二表达明显增强，P＊．01，统计学上有明显差异；应用生长激素后 ·3·ICAM则表达明显减少，梗阻性黄疽生长激素干扰组与梗阻性黄疽组两组 ICAMJ表达的比较 P＜0．05，两组数值有明显的统计学差异。 讨 论 近年来研究发现粘附分子的表达变化与梗阻性黄疽术后感染和多脏器损害等并发症