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第一部分单核源性树突状细胞接受热灭活白念珠菌刺激后microRNA表达谱的改变本部分实验采用microRNA芯片分析了接受热灭活白念珠菌刺激后的单核源性树突状细胞microRNA表达谱的改变,并进行了生物信息学分析。结果表明:有62个microRNA在热灭活白念珠菌刺激后表达上调,有4个microRNA在热灭活白念珠菌刺激后表达下调。我们对表达发生变化的microRNA进行了Gene Ontology、pathway、调控网络和转录因子分析,并结合文献,从中挑选出miR-203作为研究对象。第二部分miR-203负向调控热灭活白念珠菌诱导的单核源性树突状细胞表达IL-6和TNF-α在本部分研究中,我们首先采用RT-PCR法证实了芯片检测结果,发现热灭活白念珠菌可以通过TLR4,而非Dectin-1诱导单核源性树突状细胞表达miR-203。同时,我们还发现,热灭活白念珠菌可以通过TLR4和Dectin-1诱导单核源性树突状细胞表达炎症因子IL-6和TNF-α。为研究热灭活白念珠菌诱导单核源性树突状细胞表达miR-203的生物学意义,我们采用“gain-and loss-of-function”的研究手段,结果发现miR-203可以负向调节IL-6和TNF-α的产生。这些结果表明:热灭活变念珠菌诱导单核源性树突状细胞表达miR-203的生物学意义在于负向调控炎症介质IL-6和TNF-α的产生,抑制炎症反应的强度。第三部分TLR4是miR-203的作用靶点我们首先采用生物信息学软件预测除了与白念珠菌免疫识别密切相关的模式识别受体TLR4是miR-203的作用靶点之一。然后我们通过报告基因技术,证实了TLR4 mRNA的3’UTR可以与miR-203发生相互作用。最后我们将miR-203 mimics和miR-203 inhibitor转染入单核源性树突状细胞,并采用热灭活白念珠菌进行刺激。结果发现白念珠菌刺激单核源性树突状细胞可以引起其表面的TLR4表达逐渐降低,与miR-203的变化趋势刚好相反,而转染miR-203 mimics可以加速TLR4的表达下调,而转染miR-203 inhibitor则可以部分缓解TLR4的表达下调趋势。这些结果表明:在单核源性树突状细胞中,TLR4是miR-203的作用靶点。第四部分siRNA沉默单核源性树突状细胞TLR4的表达可以削弱热灭活白念珠菌诱导TNF-α和IL-6表达的能力,但并不抑制miR-203的表达为研究树突状细胞中miR-203抑制TLR4的表达是否是其负向调节IL-6和TNF-α的产生的机制所在。我们采用siRNA技术沉默了TLR4的表达,观察在此情况下,是否能重现miR-203表达上调时IL-6和TNF-α表达的变化状况。结果发现,采用siRNA沉默TLR4的表达,对导致树突状细胞在接受热灭活白念珠菌刺激后释放IL-6和TNF-α的能力降低,但miR-203的表达没有变化。这表明:miR-203负向调节IL-6和TNF-α是通过抑制TLR4表达介导的。