【摘 要】
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肝细胞癌(HCC)是人类肿瘤中少数同病毒感染相关的肿瘤之一,乙型肝炎病毒(HBV)感染是肝细胞癌发生的主要诱因,两种病毒调节蛋白乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)和大表面蛋白(LHBs)的延
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肝细胞癌(HCC)是人类肿瘤中少数同病毒感染相关的肿瘤之一,乙型肝炎病毒(HBV)感染是肝细胞癌发生的主要诱因,两种病毒调节蛋白乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)和大表面蛋白(LHBs)的延时过量表达可以使细胞内原来受到抑制的一些基因的转录过程解除控制,从而促进细胞增生,同时使肝细胞对其他促癌因子更为敏感。通过pre-miRNAs结构也可以携带siRNA进入细胞内发挥RNAi作用,发挥作用模式接近于人体生理情况。构建携带HBx RNAi靶点基于miRNA系统的慢病毒,以不同感染复数(MOI)值感染HepG2.2.15细胞,利用ELISA方法和western blot方法分析细胞内外HBsAg表达水平变化,实时荧光定量PCR方法分析mRNA水平的变化,同时对细胞培养上清中HBV DNA进行定量;HepG2.2.15细胞于裸鼠背部皮下成瘤,观察肿瘤的生长能力变化;基因芯片筛选相关信号转导通路基因。实验证实该RNAi系统可以成功的抑制HBV复制和抗原表达,RNAi后HCC细胞生长能力明显下降,HBV在肝细胞癌变过程触发了一些特异性的癌变信号转导通路。
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