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试验一,酯化葡甘露聚糖最佳合成条件的研究
选择六偏磷酸钠与葡甘露聚糖的质量比为1∶4、1∶5、1∶6、1∶7、1∶8和1∶9,pH值为1.0、1.3、1.6、1.9、2.2、2.5、2.8、3.1、3.4、3.7和4.0,反应时间为60、80、100、120、140、160和180min,反应温度为45、50、55、60、65和70℃,研究不同的六偏磷酸钠与葡甘露聚糖的质量比、pH值、反应时间和反应温度对葡甘露聚糖酯化改性程度的影响。结果表明,当葡甘露聚糖与六偏磷酸钠质量比为7∶1、pH值为3.0、反应温度为60℃、反应时间为70min时,酯化产物中磷的含量最高,葡甘露聚糖的酯化程度最高。由此表明,合成酯化葡甘露聚糖的最佳条件为:六偏磷酸钠与葡甘露聚糖质量比7∶1、pH值3.0、反应温度60℃、反应时间70min。
试验二,酯化葡甘露聚糖对T-2毒素体外吸附能力的研究
配制100μg/L的T-2毒素溶液,第1组为空白对照组,不添加EGM;第2~6组分别添加24mg、32mg、40mg、48mg和56mg的EGM。充分混匀,在37±0.5℃恒温水浴吸附反应4h,4000r/min离心10min,取上清液常温保存检测各组上清液中T-2毒素的含量,研究EGM在体外对T-2毒素的吸附能力。结果表明,不同水平的EGM对T-2毒素的吸附率随EGM的添加量的增大而显著增大(P<0.05),第4组、第5组和第6组差异不显著(P>0.05)。由此表明,EGM的适宜添加量为0.10%。
试验三,酯化葡甘露聚糖吸附T-2毒素对体外培养的小鼠脾细胞的影响
以RPMI-1640为基础培养基,第1组为空白对照组,第2组为阳性对照组,添加100μg/L的T-2毒素,第3组、第4组和第5组在添加100μg/L的T-2毒素的基础上分别添加24mg、40mg和56mg的EGM。培养期为3d,研究酯化葡甘露聚糖吸附T-2毒素对体外培养的小鼠脾细胞的影响。结果表明,第1组、第4组和第5组的脾细胞存活率、SOD活性和淋巴细胞转化率极显著高于第2组(P<0.01);第1组、第4组和第5组培养液中MDA含量显著低于第2组(P<0.05);第1组、第4组和第5组各项指标差异不显著(P>0.05)。由此表明,EGM能很好地吸附T-2毒素,减轻T-2毒素对体外培养的小鼠脾细胞的毒性作用,在饲料中EGM的适宜添加剂量为0.10%。
试验四,饲料中添加酯化葡甘露聚糖对小鼠T-2毒素中毒的预防作用
选择150只21d健康的昆明小白鼠,随机分为5组,第1组为空白对照组,饲喂基础日粮;第2组为阳性对照组,在基础日粮中添加0.45mg/kg的T-2毒素;第3~5组为试验组,每组在添加0.45mg/kg的T-2毒素的基础日粮中分别添加0.05%、0.10%和0.15%的EGM。试验期为30d,研究T-2毒素染毒饲料中添加EGM对小鼠T-2毒素中毒的预防作用。结果表明,试验至30d时,第1组、第4组和第5组小鼠平均日增重、血液红细胞数量、白细胞数量和血红蛋白含量显著高于第2组(P<0.05);第1组、第4组和第5组血清中MDA含量、AST活性、ALT活性和LDH活性显著低于第2组和第3组(P<0.05);第1组、第4组和地5组血清中T-SOD活性和动物体抑制OH的能力显著高于第2组和第3组(P<0.05);第1组、第4组和地5组小鼠脾脏指数和胸腺指数显著高于第2组(P<0.05);第1组、第4组和第5组小鼠脾淋巴细胞转化率极显著高于第2组(P<0.01);第1组、第4组和第5组小鼠肝脏T-2毒素含量极显著低于第2组(P<0.01);第1组、第4组和第5组各项指标差异不显著(P>0.05)。由此表明,EGM能很好地吸附T-2毒素,减轻T-2毒素对小鼠的毒性损伤作用,在饲料中的最适添加剂量为0.10%。