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己烯雌酚(diethylstibestrol, DES)是一种人工合成的雌激素,由于其在促进动物生长、增加蛋白质沉积、提高饲料转化率和减少脂肪等方面作用明显,因此曾作为促生长剂被广泛应用于畜牧养殖业。国际癌症研究机构(IARC)研究发现,DES对人体具有致癌和致畸作用,因此,世界各国均规定养殖中不得以任何途径和方式使用DES,但受经济利益的驱使,当前非法使用和滥用己烯雌酚的现象依然存在。目前,国内外已建立了多种检测DES残留的理化检测方法,虽然此类方法较精确、灵敏,但均存在检测成本高、仪器昂贵、周期长和检测技术复杂等缺点。因此研究开发成本低廉、检测迅速、操作简便、灵敏度高的检测技术和产品势在必行。酶联免疫吸附分析法正逐渐应用于药物的残留检测,该类方法除具有灵敏、快速、简便的优点外,还有可同时检测多个样品、特异性强等特点。本研究采用单克隆抗体技术和酶联免疫吸附测定等技术,合成DES人工抗原,筛选制备出抗DES单克隆抗体,建立了检测DES残留的ELISA检测方法。首先对DES的分子结构进行修饰,通过一系列化学反应及纯化得到己烯雌酚-单-羧基丙基-醚(DES-MCPE),采用混合酸酐法和碳二亚胺法分别与牛血清蛋白(BSA)、人血清白蛋白(HSA)共价偶联,制备了人工抗原DES-MCPE-BSA和DES-MCPE-HSA。紫外扫描和免疫学方法初步判定偶联成功。选择6-8周龄的BALB/c雌性小鼠进行免疫,研究了免疫方式、免疫剂量、载体蛋白及免疫次数对免疫效价的影响。结果显示：背部皮下逐步加强免疫比多次同剂量免疫免疫效价高；首免剂量100μg/只比50μg/只免疫效价高；BSA作载体免疫的血清效价及亲和力显著高于HSA载体；免疫五次后即可获得较高的免疫效价。用活性酯法合成的DES-MCPE-BSA作为免疫原免疫小鼠,用混合酸酐法合成的DES-MCPE-HSA作为包被原,五免后阳性血清效价达到1：256,000,利用杂交瘤技术获得1株能稳定分泌抗DES特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株2F6。利用体内诱生法将细胞株2F6接种到小鼠体内,制备了抗DES腹水,其蛋白浓度为37.4mg/mL,腹水效价达1：512,000。利用杂交瘤细胞株2F6的小鼠腹水单抗建立了检测DES残留的间接竞争ELISA方法。方阵实验确定了包被原的最佳包被稀释度为1：32,000,抗体的最佳工作浓度为1：64,000。在优化条件下,建立了DES对包被原DES-MCPE-HSA和抗体结合反应的间接竞争ELISA标准抑制曲线,线性方程为Y=-0.4657x+0.7373(R2=0.9925),IC5o为4.16ng/mL。交叉实验表明,该单抗与内源性β-雌二醇(E2)及其它常见禁用激素及抗菌药物交叉反应无交叉反应,与结构类似物双烯雌酚、己烷雌酚的交叉反应率分别为2.14%和1.46%。将建立的间接竞争ELISA初步应用于猪肝脏组织和肌肉组织的添加回收试验,样品经前处理后用于测定。当猪肝、肌肉样品处理液作8倍以上稀释时,样品基质干扰基本消失,且0-50ng/mL范围内,建立ELISA标准曲线的线性方程为：Y=-0.3949x+0.7137(R2=0.9935)。用1、5、1Ong/mL的己烯雌酚标准液做添加回收试验,经检测肝脏药物回收率在89.7%-105.9%之间,批内差异在4.94%-8.24%之间,批间差异在5.33%～6.85%之间。