本论文工作采用行为学实验、微透析、免疫组化以及电生理等技术研究了两个特异性钠通道调制剂BmK I和BmK IT2对大鼠伤害性感受和癫痫发作的调制作用及其机制。研究内容分为三部分:1.BmK IT2 抑制炎症刺激诱导的大鼠伤害性行为以及脊髓 c-Fos 的表达 经行为学实验观察到,无论在福尔马林注射前 1 min 或注射后 10 min 条件下,向大鼠足底皮下注射 BmK IT2,均能对福尔马林诱导的自发痛反应产生明显的抑制作用。福尔马林注射前给予 BmK IT2 能够抑制福尔马林诱导的双相自发痛反应,并且对第二相自发痛反应的抑制作用明显强于福尔马林注射后给药对第二相的抑制作用。然而,脊髓的 c-Fos 表达则产生了与行为学实验相反的结果,BmK IT2 在福尔马林注射后给药对福尔马林诱导的脊髓 c-Fos 表达的抑制作用明显强于预先治疗组。此外,BmK IT2 可剂量依赖性的抑制角叉菜胶诱导的热痛觉过敏。结果提示,BmK IT2 对福尔马林诱导的自发痛反应及脊髓 c-Fos 表达和对角叉菜胶诱导的机械痛觉过敏的抑制作用与BmK IT2对外周伤害性感受器上电压门控钠电流的部分阻断有关;这为 BmK IT2 研发成为新型的肽类镇痛药提供了良好的理论和实验依据。2.BmK 粗毒和 BmK I 诱导的大鼠脊髓背角氨基酸类神经递质的释放 采用微透析采样与高效液相色谱荧光检测技术, 分析 BmK 粗毒和其主要致死成分BmK I 诱发炎症痛过程中同侧脊髓背角(腰膨大)氨基酸含量的动态变化。实验结果表明,BmK 粗毒经大鼠后足皮下注射,可在 30 分钟内诱发脊髓背角内兴奋 1<WP=4>特异性钠通道调制剂对大鼠伤害性感受和癫痫发作的调制作用及其机制研究性神经递质 Asp 和 Glu 的含量明显升高,抑制性神经递质 GABA 则在 60 分钟内显著性升高。同样,特异性钠通道调制剂 BmK I 经大鼠足底注射后, 30 分钟内也可观察到Asp和Glu的释放量较对照组明显升高,但增加幅度低于BmK 粗毒诱导的兴奋性神经递质的释放,然而 GABA 的释放量在整个实验过程中无明显变化。结果提示,BmK I 参予了东亚钳蝎粗毒诱发的脊髓背角内兴奋性神经递质的释放增加,与此相对应,抑制性神经递质 GABA 的释放增加可能同蝎毒中的抗伤害性成分有关。3.BmK I 海马内注射诱导的大鼠惊厥发作 行为学实验显示,BmK I 经大鼠海马内注射可诱发强烈的惊厥发作,并伴有部分大鼠死亡;与之相对应的是,注射 BmK I 后,在极短的时间内可记录到不同类型的癫痫波,且可持续 24 小时或更久的时间;BmK I 可诱导大鼠海马内 c-Fos 呈现时间和区域特异性的表达;全细胞膜片钳记录培养的海马神经元,发现 BmK I 可延长其中 7/13 个神经元钠电流的失活化过程。这些结果表明,海马是 BmK I 产生神经毒性的靶区,其诱导的强烈惊厥发作和癫痫波的产生及 c-Fos 的表达均可归因于 BmK I 对海马神经元上电压门控钠通道的调制作用。BmK I 诱导的大鼠惊厥发作可作为有益的惊厥发作模型用于研究癫痫的发病机制和抗癫药的临床治疗机制。结论:特异性作用于电压门控钠通道第四结合位点的 BmK IT2 可抑制大鼠炎症痛诱导的伤害性感受反应及脊髓的 c-Fos 表达,其抗伤害性感受的机制应归因于 BmK IT2 对外周伤害性感受器上电压门控钠通道的调制;作用于电压门控钠通道第三结合位点的 BmK I,其致伤害性感受和致癫机理可归因于 BmK I 对特异电压门控钠通道亚型的选择性调制。