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目的：
肺炎支原体(mycoplasma pneumoniae，MP)感染是儿童时期常见的呼吸道感染性疾病，近年来发病率呈明显上升趋势，而且部分患儿病情严重，常累及全身多个系统，出现肺外并发症，因此在感染早期使得病情得到控制是治疗的关键。1，25-二羟维生素D3[1，25(OH)2D3]是维生素D3生物活性代谢产物，它不仅是体内骨代谢及钙稳态的关键性调控因子，同时还是一种第二类固醇激素，具有重要的免疫调节作用。研究发现血清维生素D的水平降低与上呼吸道感染的增加有关;维生素D能够促进抗菌肽表达发挥作用，提示维生素D作为一种免疫调节剂在肺炎支原体感染中具有重要作用，但其作用机制尚不十分清楚。可能与机体的免疫状态有关。最新的研究发现抗菌肽具有抑制MP生长的作用，我们推测维生素D可能通过维生素D受体(vitamin Dreceptor, VDR)影响阳离子抗微生物肽相关肽(cathelin-related antimicrobial peptide，CRAMP)的表达，参与了MP与机体间的损伤和抗损伤作用，可能参与了肺炎支原体感染的发病机制。本实验从组织分子水平研究VDR及CRAMP在肺炎支原体感染小鼠肺组织的动态表达情况，探讨VDR、CRAMP在MP感染中的抗微生物作用及MP感染的发病机制，为MP感染的临床治疗提供新的治疗途径奠定理论和实验基础。
方法：
选用生后4周龄BALB/c小鼠52只，雌雄各半，随机分为MP感染组32只（每组8只）和对照组20只（每组5只）。置于SPF级清洁动物室，在标准条件下分笼饲养。10％水合氯醛0.05ml/只腹腔注射麻醉BALB/c小鼠，感染组每只BALB/c小鼠滴鼻接种浓度为108ccu/ml MP菌液0.02ml，将小鼠头后仰30-45℃，随小鼠的自然呼吸动作，MP菌液到达下呼吸道。正常对照组以PBS代替肺炎支原体给小鼠滴鼻接种。每个时间点取5只正常小鼠做对照。对照组给予滴鼻吸入等量的PBS。在感染后的第3、7、14、21天四个时间点(MP3，MP7，MP14，MP21)对感染小鼠和对照组小鼠进行取材。右肺进行支气管肺泡灌洗液，用PCR检测MP-DNA;左肺，4％多聚甲醛固定，肺组织石蜡包埋切片后行HE染色观察病理变化;免疫组化方法测定各组肺组织VDR蛋白的表达情况;实时定量PCR测定各组肺组织中VDR mRNA的表达;Wcstern blotting方法检测的各组肺组织中CRAMP的表达情况。
结果：
1.MP感染模型鉴定结果:(1)病理改变;光镜下，MP感染BALB/c小鼠3天后，主要表现为肺间质性炎症改变，肺泡间隔增宽，大量的淋巴细胞和巨噬细胞浸润在支气管和血管周围及肺泡间隔，肺泡内有渗出;MP感染BALB/c小鼠7天后这种间质性炎症改变进一步加重，肺泡间隔明显增宽，更多的的淋巴细胞和巨噬细胞浸润在支气管和血管周围及肺泡间隔;MP感染BALB/c小鼠14天后，间质性炎症减轻，肺泡间隔稍有增宽，淋巴细胞和巨噬细胞浸润在支气管和血管周围及肺泡间隔的浸润减少;MP感染BALB/c小鼠21天后炎症基本消退，但仍然可以见到肺泡间隔稍有增宽，少量的淋巴细胞和巨噬细胞浸润在支气管和血管周围及肺泡间隔。而对照组肺泡结构较为均匀与清晰，肺泡内无渗出，偶见淋巴细胞和巨噬细胞浸润在支气管和血管周围及肺泡间隔.(2) PCR方法检测BLAF中的MP-DNA:可以看到结果呈阳性，MP经呼吸道感染BALB/c小鼠成功。
2.肺组织VDR的表达:各组均见有棕黄色颗粒表达，主要表达在气道上皮细胞的胞浆中;MP3组棕黄色颗粒最多，染色深，表达最强，光密度值为:0.4682±0.1262; MP7组棕黄色颗粒少，染色浅，表达较弱，光密度值为:0.22±0.0384;MP14为:0.2743±0.0623; MP21表达再次升高为:0.3996±0.08;对照组为:0.3231±0.0265;MP3、MP7、MP21分与对照组相比较差异有统计学意义(P＜0.05);各感染组间，除了MP3和MP21相比之外，余组相比较差异均有统计学意义(P＜0.05)。
3.VDR mRNA的表达:肺组织中:mp3和mp21的相对扩增倍数分为17.05±2.59和17.95±3.62，与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05); mp7和mp14分别为1.78+0.27和1.80+0.2，与对照组相比差异无统计学意义(P＜0.05);各感染组之间，mp3、mp21分别与mp7、mp14相比较差异均有统计学意义(P＜0.05)。
4.CRAMP蛋白的表达:Western blotting结果显示在肺组织中MP3条带灰度值为1.51+0.36，与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05); MP14为1.13+0.26，与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05); MP7和MP21分别为0.67+0.08和0.94±0.05，CRAMP蛋白表达强度减少，与对照组相比较差异无统计学意义。各感染组之间，MP3分别与MP7、MP14、MP21相比较差异均有统计学意义(P＜0.05); MP14与MP7相比较差异有统计学意义(P＜0.05)。
结论：
MP感染小鼠后肺组织VDR及CRAMP表达呈现动态变化，在MP3天时出现增加，MP7天降低，MP14、MP21天再次出现增加趋势，提示VDR及CRAMP可能参与MP感染的损伤及抗损伤机制;VDR及CRAMP在MP感染中表达变化趋势相似，提示在MP感染的肺组织中可能通过VDR来影响CRAMP的表达变化。