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脑血管疾病多发于中老年人，其中缺血性脑血管病(ischemic cerebrovascular disease，ICVD)发病率最高。快速恢复脑组织的血氧供应是治疗的主要原则，而二次的再灌注损伤不可避免，由此导致的脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia reperfusion injury，CI/RI)成为医疗救治亟待解决的重大难题。由于CI/RI的病理生理机制过程复杂，病因多样，迄今尚无明确认识，再灌注引起神经损伤尚缺乏有效的治疗方法。因此，积极开发针对CI/RI神经保护剂对患者脑组织受损的恢复具有重要的临床价值。
太白楤木总皂苷(total saponins extracted from Aralia taibaiensis，sAT)是五加科楤木属植物太白楤木(Aralia taibaiensis)的主要活性成分。已有研究发现，sAT具有抗炎、抗氧化、降血脂、降血糖等“多靶点效应”，并可透过血-脑屏障发挥多种生物学作用，显示出对治疗ICVD有益的作用，但具体机制不明。由于炎症、氧化应激等因素在CI/RI引起的脑组织损伤中扮演重要角色，抗炎、抑制氧化应激反应能够有效控制CI/RI导致的损伤，也是目前减轻多脏器缺血再灌注损伤的重要机制，因此，我们设想sAT很可能对CI/RI具有较好的神经保护作用，有必要对其进行深入研究。
目的：通过建立小鼠(MCAO/R)模型和BV2细胞(OGD/R)模型来评价sAT的神经保护作用，从整体动物和细胞分子水平考察sAT对CI/RI的保护作用及潜在机制，以期为寻找新的中药神经保护剂提供实验依据。
方法：第一部分：太白楤木总皂苷对小鼠(MCAO/R)模型的脑保护作用研究建立大脑中动脉栓塞(MCAO/R)小鼠模型，通过神经行为学实验观察对小鼠运动功能；TTC染色法测定脑组织梗死灶变化；试剂盒测定脑组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性和丙二醛(MDA)含量；ELISA法测定脑组织中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)和细胞间粘附因子(ICAM-1)炎症因子含量；WB法测定脑组织中胞核NF-κB蛋白及胞质NF-κB、I-κBα及pI-κBα蛋白表达变化。
第二部分：太白楤木总皂苷对(OGD/R)模型下BV2细胞保护作用的研究在常氧及氧糖剥夺/复氧(OGD/R)的条件下培养小胶质细胞(BV2)，给予太白楤木总皂苷进行预处理，采用CCK-8试剂盒测定BV2的存活率；AnnexinV-FITC/PI双标记流式细胞仪测定BV2凋亡率；LDH试剂盒检测细胞毒性的大小；ELISA法测定BV2细胞中TNF-α、IL-1β、ICAM-1等炎性因子含量；WB法检测BV2细胞中TLR4、NF-κB等蛋白表达情况。
结果：第一部分：太白楤木总皂苷对小鼠(MCAO/R)模型的脑保护作用研究1.行为学实验结果显示，与Sham组相比，Model组小鼠评分较高(P＜0.01)，差异有统计学意义；与Model组相比，给予阳性药物及sAT预处理后，评分均明显降低(P＜0.05)，差异有统计学意义。TTC染色结果显示，与Sham组相比，Model组小鼠的脑梗死体积增大(P＜0.01)，差异有统计学意义；与Model组相比，给予阳性药物及sAT预处理后，脑梗死体积均明显减少(P＜0.01)，差异有统计学意义。
2.抗氧化活性结果显示，与Sham组相比，Model组的SOD、GSH-Px活性明显下降(P＜0.01)，而MDA含量明显增高(P＜0.01)，差异有统计学意义；与Model组相比，给予阳性药物及sAT预处理后，SOD、GSH-Px活性均有所升高(P＜0.05)，而MDA含量明显减少(P＜0.05)，差异有统计学意义。
3.ELISA法结果显示，与Sham组相比，Model组小鼠的TNF-α、IL-1β和ICAM-1含量明显上升(P＜0.01)，差异有统计学意义；与Model组相比，给予阳性药物和sAT预处理后，TNF-α、IL-1β和ICAM-1含量均下降(P＜0.05，P＜0.01)，差异有统计学意义。
4.WB法结果显示，与Sham组相比，Model组小鼠脑组织中胞浆pI-κBα蛋白增多，胞浆中的NF-κB含量减少，而胞核中的NF-κB明显增加(P＜0.01)，差异有统计学意义；与Model组相比，给予阳性药物及sAT预处理后，胞核中NF-κB表达下降，I-?Bα磷酸化水平提高，I-?Bα含量降低，I-?Bα与NF-κB解离，NF-κB核转位显著提高(P＜0.05)，差异有统计学意义。
第二部分：太白楤木总皂苷对(OGD/R)模型下BV2细胞保护作用的研究1.CCK-8结果显示，与control组相比，OGD/R组中的BV2细胞活性明显下降(P＜0.01)，差异有统计学意义；与OGD/R组相比，在加入sAT进行预处理，BV2的活性显著增加(P＜0.05)，差异有统计学意义。LDH试剂盒结果显示，与control组相比，OGD/R组中LDH的释放量显著上升(P＜0.01)，与OGD/R组相比，在进行sAT预处理后，LDH的释放量明显下降(P＜0.05)，差异有统计学意义。
2.流式细胞仪结果显示，与control相比，OGD/R组的BV2细胞凋亡率显著增加(P＜0.01)；与OGD/R组相比，在给予sAT预处理后，BV2细胞凋亡率明显降低，其中高浓度尤为明显(P＜0.01)，差异有统计学意义。
3.ELISA法结果显示，与control组相比，OGD/R组中TNF-α、IL-1β及ICAM-1炎症因子显著上升(P＜0.01)，差异有统计学意义；与OGD/R组相比，在给予sAT预处理后，TNF-α、IL-1β和ICAM-1炎症因子含量的均明显降低(P＜0.05，P＜0.01)，差异有统计学意义。
4.WB法结果显示，与control相比，OGD/R组中TLR4、NF-κB蛋白表达均明显升高(P＜0.01)，差异有统计学意义；与OGD/R组相比；在给予sAT预处理后，TLR4、NF-κB蛋白表达均显著降低(P＜0.05)，差异有统计学意义。
结论：通过建立小鼠(MCAO/R)模型和细胞(OGD/R)模型评价sAT对CI/RI的保护作用，发现sAT可减少炎性因子释放、改善氧化应激损伤及降低细胞凋亡作用，并缓解CI/RI受损情况，改善大脑生理功能，对CI/RI具有较好的中枢神经保护作用，其内在机制可能通过抑制TLR4/NF-κB信号通路激活有关。
太白楤木总皂苷(total saponins extracted from Aralia taibaiensis，sAT)是五加科楤木属植物太白楤木(Aralia taibaiensis)的主要活性成分。已有研究发现，sAT具有抗炎、抗氧化、降血脂、降血糖等“多靶点效应”，并可透过血-脑屏障发挥多种生物学作用，显示出对治疗ICVD有益的作用，但具体机制不明。由于炎症、氧化应激等因素在CI/RI引起的脑组织损伤中扮演重要角色，抗炎、抑制氧化应激反应能够有效控制CI/RI导致的损伤，也是目前减轻多脏器缺血再灌注损伤的重要机制，因此，我们设想sAT很可能对CI/RI具有较好的神经保护作用，有必要对其进行深入研究。
目的：通过建立小鼠(MCAO/R)模型和BV2细胞(OGD/R)模型来评价sAT的神经保护作用，从整体动物和细胞分子水平考察sAT对CI/RI的保护作用及潜在机制，以期为寻找新的中药神经保护剂提供实验依据。
方法：第一部分：太白楤木总皂苷对小鼠(MCAO/R)模型的脑保护作用研究建立大脑中动脉栓塞(MCAO/R)小鼠模型，通过神经行为学实验观察对小鼠运动功能；TTC染色法测定脑组织梗死灶变化；试剂盒测定脑组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性和丙二醛(MDA)含量；ELISA法测定脑组织中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)和细胞间粘附因子(ICAM-1)炎症因子含量；WB法测定脑组织中胞核NF-κB蛋白及胞质NF-κB、I-κBα及pI-κBα蛋白表达变化。
第二部分：太白楤木总皂苷对(OGD/R)模型下BV2细胞保护作用的研究在常氧及氧糖剥夺/复氧(OGD/R)的条件下培养小胶质细胞(BV2)，给予太白楤木总皂苷进行预处理，采用CCK-8试剂盒测定BV2的存活率；AnnexinV-FITC/PI双标记流式细胞仪测定BV2凋亡率；LDH试剂盒检测细胞毒性的大小；ELISA法测定BV2细胞中TNF-α、IL-1β、ICAM-1等炎性因子含量；WB法检测BV2细胞中TLR4、NF-κB等蛋白表达情况。
结果：第一部分：太白楤木总皂苷对小鼠(MCAO/R)模型的脑保护作用研究1.行为学实验结果显示，与Sham组相比，Model组小鼠评分较高(P＜0.01)，差异有统计学意义；与Model组相比，给予阳性药物及sAT预处理后，评分均明显降低(P＜0.05)，差异有统计学意义。TTC染色结果显示，与Sham组相比，Model组小鼠的脑梗死体积增大(P＜0.01)，差异有统计学意义；与Model组相比，给予阳性药物及sAT预处理后，脑梗死体积均明显减少(P＜0.01)，差异有统计学意义。
2.抗氧化活性结果显示，与Sham组相比，Model组的SOD、GSH-Px活性明显下降(P＜0.01)，而MDA含量明显增高(P＜0.01)，差异有统计学意义；与Model组相比，给予阳性药物及sAT预处理后，SOD、GSH-Px活性均有所升高(P＜0.05)，而MDA含量明显减少(P＜0.05)，差异有统计学意义。
3.ELISA法结果显示，与Sham组相比，Model组小鼠的TNF-α、IL-1β和ICAM-1含量明显上升(P＜0.01)，差异有统计学意义；与Model组相比，给予阳性药物和sAT预处理后，TNF-α、IL-1β和ICAM-1含量均下降(P＜0.05，P＜0.01)，差异有统计学意义。
4.WB法结果显示，与Sham组相比，Model组小鼠脑组织中胞浆pI-κBα蛋白增多，胞浆中的NF-κB含量减少，而胞核中的NF-κB明显增加(P＜0.01)，差异有统计学意义；与Model组相比，给予阳性药物及sAT预处理后，胞核中NF-κB表达下降，I-?Bα磷酸化水平提高，I-?Bα含量降低，I-?Bα与NF-κB解离，NF-κB核转位显著提高(P＜0.05)，差异有统计学意义。
第二部分：太白楤木总皂苷对(OGD/R)模型下BV2细胞保护作用的研究1.CCK-8结果显示，与control组相比，OGD/R组中的BV2细胞活性明显下降(P＜0.01)，差异有统计学意义；与OGD/R组相比，在加入sAT进行预处理，BV2的活性显著增加(P＜0.05)，差异有统计学意义。LDH试剂盒结果显示，与control组相比，OGD/R组中LDH的释放量显著上升(P＜0.01)，与OGD/R组相比，在进行sAT预处理后，LDH的释放量明显下降(P＜0.05)，差异有统计学意义。
2.流式细胞仪结果显示，与control相比，OGD/R组的BV2细胞凋亡率显著增加(P＜0.01)；与OGD/R组相比，在给予sAT预处理后，BV2细胞凋亡率明显降低，其中高浓度尤为明显(P＜0.01)，差异有统计学意义。
3.ELISA法结果显示，与control组相比，OGD/R组中TNF-α、IL-1β及ICAM-1炎症因子显著上升(P＜0.01)，差异有统计学意义；与OGD/R组相比，在给予sAT预处理后，TNF-α、IL-1β和ICAM-1炎症因子含量的均明显降低(P＜0.05，P＜0.01)，差异有统计学意义。
4.WB法结果显示，与control相比，OGD/R组中TLR4、NF-κB蛋白表达均明显升高(P＜0.01)，差异有统计学意义；与OGD/R组相比；在给予sAT预处理后，TLR4、NF-κB蛋白表达均显著降低(P＜0.05)，差异有统计学意义。
结论：通过建立小鼠(MCAO/R)模型和细胞(OGD/R)模型评价sAT对CI/RI的保护作用，发现sAT可减少炎性因子释放、改善氧化应激损伤及降低细胞凋亡作用，并缓解CI/RI受损情况，改善大脑生理功能，对CI/RI具有较好的中枢神经保护作用，其内在机制可能通过抑制TLR4/NF-κB信号通路激活有关。