【摘 要】
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胡杨(Populus euphratica Oliv.)是干旱沙漠地区生长的唯一乔木建群树种,耐旱、耐盐、耐高低温.胡杨强大的根系及其"随水而生"的向水性生长能力,对维持该树种在干旱沙漠地区
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胡杨(Populus euphratica Oliv.)是干旱沙漠地区生长的唯一乔木建群树种,耐旱、耐盐、耐高低温.胡杨强大的根系及其"随水而生"的向水性生长能力,对维持该树种在干旱沙漠地区存活具有特殊作用,其蕴涵的耐旱基因资源对揭示胡杨干旱适应性和建立林木耐旱基因共享平台具有重要的意义.
本研究通过生物信息学相关分析,以电子克隆技术获得胡杨木葡聚糖内转糖基酶基因(PeXET)开放阅读框(ORF),并以此设计引物进行胡杨材料中相关基因的克隆.
以向水性诱导的胡杨实生苗根系、茎、叶,愈伤组织等为材料,通过RT-PCR方法克隆PeXET基因,从胡杨根系、愈伤组织反转录的cDNA中克隆获得PeXET开放阅读框架(ORF),而茎和叶中尚未克隆到表达的PeXET;以RACE方法获得PeXET3端UTR序列.经测序分析,胡杨PeXET基因开放阅读框架(ORF)全长882bp,编码由293个氨基酸组成的多肽,预测分子量为33.8 kDa.该基因序列已在GenBank数据库注册,序列号为EF612703.
以含有pBin438-PeXET植物表达载体的农杆菌菌株GV3101转化烟草,转基因植株经过PCR、RT-PCR及Southern杂交等分子技术检测筛选,获得PeXET基因已经整合到烟草基因组中并表达的植株3个.为后续基因的功能鉴定奠定了基础.
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