初情期雌性山羊lncRNA的筛选与鉴定

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初情期是雌性哺乳动物发育过程中重要的阶段,是具备繁殖能力的关键标志。最近研究发现,哺乳动物初情期启动受表观遗传调控。长链非编码RNA(Long noncoding RNA,lncRNA)做为表观遗传的重要组成部分,几乎参与调控哺乳动物各个发育阶段。然而,目前lncRNA在山羊初情期调控方面的研究还未见报道。本研究通过利用RNA-seq技术分析雌性山羊下丘脑转录本表达模式,筛选参与调控山羊初情期的lncRNA及其富集通路并进行初步的功能验证。通过公羊试情,观察外阴及卵巢变化确定雌性山羊初情期时间。首先,采用二代高通量测序技术对初情期(月龄:4.5M5M;体重:16.17±0.50kg)和初情期前(月龄:2.5M3M;体重:8.30±0.61kg)雌性山羊下丘脑转录本进行测序分析,筛选差异表达的lncRNA,然后进行lncRNA靶基因预测和通路富集分析,并用荧光定量PCR方法对测序结果进行验证,筛选出候选lncRNA。分离1d雌性大鼠下丘脑神经元进行原代培养,采用siRNA干扰方法验证候选lncRNA的功能,荧光定量PCR检测靶基因表达水平。结果表明,筛选到2943个lncRNAs,包括2012个差异表达的lncRNAs靶向作用于5412个蛋白编码基因,发现有许多差异lncRNA的靶基因与初情期调控有关;通过KEGG和GO分析富集到许多参与调控初情期和生殖相关的通路,如催产素信号通路,类固醇生物合成通路和信息素受体激活信号通路。体外添加siRNA干扰候选lncRNA XLOC446331表达,发现下丘脑神经元中lncRNA XLOC446331及其靶基因IGFBP5表达显著下调(P<0.01),初情期相关的IGF-1表达也受到显著抑制(P<0.05)。总之,本试验首次报道了初情期雌性山羊下丘脑存在差异表达的lncRNA,这些差异表达的lncRNA及其靶基因富集通路很可能在山羊生殖及初情期调控中发挥着重要作用;候选lncRNA XLOC446331可能通过作用于IGFBP5基因参与调控初情期。这为进一步研究山羊初情期启动调控机制提供新的参考。
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