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中药复方二至丸是临床上用于治疗肝肾阴虚及妇科疾病的验方,由女贞子和墨旱莲2味药材组成的,按等比合煎后制成的水蜜丸。为了探索二至丸抗骨质疏松症的作用机制,本研究首先采用新生SD雄性大鼠,考察二至丸对肾阴虚骨质疏松大鼠及下丘脑神经细胞作用的影响。给药2个月后经双能x线吸收测量法测定股骨的骨影面积、骨矿含量和骨密度;竞争放射免疫法测定血清雌二醇含量;MTT法测定二至丸含药血清对左旋单钠谷氨酸所致下丘脑神经细胞死亡的影响。结果发现中药复方二至丸对模型大鼠股骨骨密度、骨矿含量及骨影面积的下降均有明显改善作用,并且增加血清雌二醇浓度。同时,二至丸含药血清能显著抑制左旋单钠谷氨酸所致下丘脑神经细胞的死亡。实验证明中药复方二至丸对肾阴虚骨质疏松具有防治作用,其作用机制与抑制下丘脑神经细胞死亡和升高血清雌二醇水平有关。用新生大鼠颅盖骨成骨细胞和由单核巨噬细胞诱导的破骨细胞,以及UMR106和RAW264.7细胞株为筛选模型,采用血清药理方法学研究方法,通过测定二至丸的动物含药血清对成骨细胞的增殖、抗酒石酸酸性磷酸酶的活性,以及破骨细胞的形成和分化等指标,考察了二至丸抗阴虚骨质疏松的作用机制。结果表明二至丸抗骨吸收的活性良好,而其促进骨形成的阴性结果恰好吻合了二至丸滋肾阴而非壮肾阳的组方机制,证明了中医治疗理论。为了明确中药复方二至丸中抗骨质疏松物质基础,采用了血清化学方法学,用HPLC对中药复方二至丸的含药血清中的成分进行了分析。通过对含药血清和体外样品指纹图谱的比对,找到入血成分和可能的抗阴虚骨质疏松的成分。以2005版药典规定测定齐墩果酸和熊果酸含量为指标,考察乙醇浓度(%)、回流时间(T)和固液比三因素,对中药复方二至丸的最佳提取工艺进行优化。由于分别以齐墩果酸和熊果酸的溶出率为指标进行回归得到两个不同的方程,说明齐墩果酸和熊果酸两者溶出率不能在同一条件下同时达到最大。介于此种情况,参照文献数据将两个指标得到的不同结果进行了权重拟合,得到了以齐墩果酸和熊果酸共同溶出率为最大的最佳提取方案。采用了近代中药活性部位跟踪常用的血清药理方法学,考察了不同浓度乙醇提取二至丸所得到的动物含药血清对破骨前体细胞株RAW264.7增殖和破骨细胞分化形成的影响。实验结果表明抗骨质疏松活性得到较好体现的组出现在提取溶剂为0%-40%EtOH的范围内。