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核心岩藻糖基化修饰是一种最常见的蛋白质N-糖基化修饰之一。我们的前期研究结果表明,由核心岩藻糖基转移酶(Fut8)催化的核心岩藻糖基化修饰与系统性红斑狼疮(SLE)的发病密切相关。在SLE发生的初期,血清免疫球蛋白G(Ig G)分子上核心岩藻糖基化异常升高,并释放到血液中,成为筛查SLE与检测的重要线索。近几年来,临床上对SLE进行筛查诊断常采用间接免疫荧光法(IIF)抗核抗体(ANA)进行检测。但该方法检测效率低,仪器贵重,限制了基层医院对该病的诊断。本研究中,我们利用特异性识别核心岩藻糖基的生物素标记的AOL及特异性结合Ig G的protein G,建立了特异检测Ig G上的核心岩藻糖基化水平的夹心法斑点酶联免疫吸附实验法(Dot-ELISA)。结果显示,在SLE患者血清中,Ig G分子上的核心岩藻糖基化水平显著增高。为了进一步建立快速、灵敏的SLE诊断方法,我们原核表达并纯化了特异性识别核心岩藻糖基化的AOL凝集素,并进行胶体金标记;同时原核表达重复protein G中C3结构域3次的重组蛋白G(Sp G3),并建立胶体金连接AOL的免疫层析试纸法(Immunochromatographic strips:ICS)。基于异常核心岩藻糖基化Ig G为靶点的筛查系统性红斑狼疮患者的胶体金连接AOL免疫层析试纸法是一种快速、灵敏、可靠的诊断SLE的新方法。目的:建立一种基于异常核心岩藻糖基化Ig G的筛查SLE的新方法,对筛查SLE以及对其早期诊断提供了可靠的实验依据。方法:(1)利用Dot-ELISA以及凝集素印迹等方法检测对SLE患者血清中Ig G分子上核心岩藻糖基化的水平进行检测。(2)对Ig G具有特异性识别能力的protein G基因进行改造,重新设计Sp G3基因,并利用大肠杆菌表达性BL21原核表达Sp G3并进行纯化。(3)利用DH5α对特异性识别核心岩藻糖基结构域的AOL基因(Fle A)进行克隆,利用大肠杆菌表达性BL21原核表达AOL并进行纯化。(4)利用特异性识别Ig G的Sp G3及胶体金连接的AOL,以SLE患者的血清为研究对象,以异常增高核心岩藻糖基化的Ig G作为靶点,建立了快速筛查SLE的胶体金连接AOL的ICS。结果:(1)在SLE患者血清中,Ig G分子上的核心岩藻糖基化的表达水平显著升高,ANA滴度与核心岩藻糖基化水平呈正相关。(2)成功表达并纯化了能特异性识别并结合核心岩藻糖基化的蛋白AOL,并进行了胶体金标记。(3)表达重复protein G中C3结构域3次的重组蛋白G(Sp G3),并纯化。(4)成功建立斑点印记胶体金法。(5)成功建立特异性诊断SLE的胶体金连接AOL的ICS。应用胶体金连接AOL的ICS检测健康体检的血清呈现阴性结果,而检测SLE患者血清呈现阳性结果。结论:血清中Ig G分子上核心岩藻糖基化的水平可以作为临床上检测SLE的生物学靶点。本研究中,我们采用原核表达特异性识别核心岩藻糖基的AOL以及重复protein G中C3结构域3次的重组蛋白G(Sp G3)。由于原核细胞缺乏N-糖基化途径,唯一的糖基化是来自血清中的Ig G。因此,胶体金连接AOL的ICS具有较高的特异性和敏感性。将传统的利用间接免疫荧光法(IIF)检测SLE的4小时缩短为5分钟,为筛查SLE以及早期诊断提供了可靠的实验依据。