本论文在工业上微生物酶法拆分DL-泛解酸内酯的整体产酶能力受限的基础上,期望通过生物学手段解决酮泛解酸内酯底物自发水解问题以及D-泛解酸内酯水解酶的产酶和催化问题。以课题组保藏的酿酒酵母和高产串珠镰孢霉菌为出发菌,先通过对原料酮泛解酸内酯的有机合成的优化来自制底物,并进一步尝试通过双相催化技术,达到提高酿酒酵母的酮泛解酸内酯还原酶催化效率;后面通过对串珠镰孢霉菌进行产酶条件和固定化工艺的优化,确定了最佳发酵工艺以及固定化工艺参数;最后通过提取D-泛解酸内酯水解酶的c DNA基因序列,分别构建了二个重组表达质粒,将其转化到大肠杆菌和毕赤酵母中,通过高密度发酵培养来提高产酶量。本论文研究内容及主要结论如下:1.经改良后的有机合成法处理后,明显提升了自制底物酮泛解酸内酯的纯度,提升率达10%,通过精馏塔精馏后可用作后续的底物进行双相催化。经对双相催化技术中的双相物质以及比例的研究,以70%邻苯二甲酸二丁酯+30%PBS缓冲体系的比例催化效果最佳,较正常PBS体系催化酮泛解酸内酯的产物得率的提升率达45%,有效地抑制了底物的水解,提升了还原酶的酶解效率。2.最优的产酶条件以及固定化工艺参数:发酵液初始p H5.5,接种量为8%,温度为28℃,培养时间为48h时培养串珠镰孢霉菌,生物量为16.05g/L,酶活达426.78IU/L;海藻酸钠浓度12g/L、包埋率100g/L、Ca Cl2浓度40g/L、固定化时间2h,相对酶活和固定化收率最佳。3.利用基因提取技术和RT-PCR方法,扩增到编码D-泛解酸内酯水解酶的c DNA的结构基因,将编码D-泛解酸内酯水解酶的结构基因分别插入到大肠杆菌表达载体p ET22b（+）载体和毕赤酵母表达载体p PIC9K载体中,构建了p ET22b（+）-fsp和p PIC9K-fsp重组表达载体。通过将p ET22b（+）-fsp重组载体转化到E.coli BL21（DE3）,在IPTG诱导下,有活性酶蛋白表达,经HPLC测得湿菌体的酶活力达1007IU/L。通过将p PIC9K-fsp重组载体转化到毕赤酵母GS115中,在甲醇补料诱导下,有活性酶蛋白表达,经HPLC测得培养120h后单位湿菌体的酶活力达90.5IU/g,发酵液的酶活力达3180IU/L。