【摘 要】
:
本论文在工业上微生物酶法拆分DL-泛解酸内酯的整体产酶能力受限的基础上,期望通过生物学手段解决酮泛解酸内酯底物自发水解问题以及D-泛解酸内酯水解酶的产酶和催化问题。以课题组保藏的酿酒酵母和高产串珠镰孢霉菌为出发菌,先通过对原料酮泛解酸内酯的有机合成的优化来自制底物,并进一步尝试通过双相催化技术,达到提高酿酒酵母的酮泛解酸内酯还原酶催化效率;后面通过对串珠镰孢霉菌进行产酶条件和固定化工艺的优化,确定
论文部分内容阅读
本论文在工业上微生物酶法拆分DL-泛解酸内酯的整体产酶能力受限的基础上,期望通过生物学手段解决酮泛解酸内酯底物自发水解问题以及D-泛解酸内酯水解酶的产酶和催化问题。以课题组保藏的酿酒酵母和高产串珠镰孢霉菌为出发菌,先通过对原料酮泛解酸内酯的有机合成的优化来自制底物,并进一步尝试通过双相催化技术,达到提高酿酒酵母的酮泛解酸内酯还原酶催化效率;后面通过对串珠镰孢霉菌进行产酶条件和固定化工艺的优化,确定了最佳发酵工艺以及固定化工艺参数;最后通过提取D-泛解酸内酯水解酶的c DNA基因序列,分别构建了二个重组表达质粒,将其转化到大肠杆菌和毕赤酵母中,通过高密度发酵培养来提高产酶量。本论文研究内容及主要结论如下:1.经改良后的有机合成法处理后,明显提升了自制底物酮泛解酸内酯的纯度,提升率达10%,通过精馏塔精馏后可用作后续的底物进行双相催化。经对双相催化技术中的双相物质以及比例的研究,以70%邻苯二甲酸二丁酯+30%PBS缓冲体系的比例催化效果最佳,较正常PBS体系催化酮泛解酸内酯的产物得率的提升率达45%,有效地抑制了底物的水解,提升了还原酶的酶解效率。2.最优的产酶条件以及固定化工艺参数:发酵液初始p H5.5,接种量为8%,温度为28℃,培养时间为48h时培养串珠镰孢霉菌,生物量为16.05g/L,酶活达426.78IU/L;海藻酸钠浓度12g/L、包埋率100g/L、Ca Cl2浓度40g/L、固定化时间2h,相对酶活和固定化收率最佳。3.利用基因提取技术和RT-PCR方法,扩增到编码D-泛解酸内酯水解酶的c DNA的结构基因,将编码D-泛解酸内酯水解酶的结构基因分别插入到大肠杆菌表达载体p ET22b(+)载体和毕赤酵母表达载体p PIC9K载体中,构建了p ET22b(+)-fsp和p PIC9K-fsp重组表达载体。通过将p ET22b(+)-fsp重组载体转化到E.coli BL21(DE3),在IPTG诱导下,有活性酶蛋白表达,经HPLC测得湿菌体的酶活力达1007IU/L。通过将p PIC9K-fsp重组载体转化到毕赤酵母GS115中,在甲醇补料诱导下,有活性酶蛋白表达,经HPLC测得培养120h后单位湿菌体的酶活力达90.5IU/g,发酵液的酶活力达3180IU/L。
其他文献
循环码是一类重要的线性码,由于具有重要的理论价值和实用价值,学者们开始关注比循环码更普遍的常循环码。它们是循环码的自然扩展,在技术上可以通过移位寄存器来实现。设p是Fq的特征,q=pm,k,p和l是不同的奇素数。本文中,我们在有限域Fa上研究长度为2klmpn的常循环码。一方面利用生成多项式给出了Fq上长度为2klmpn的重根常循环码及其对偶码的结构,给出了Fa上长度为2klmpn的所有自对偶常循
随着经济建设的推进,中国商用卡车的需求量大幅增加,市场前景广阔。前轴作为卡车重要的承载件,所处位置使用环境十分恶劣,在车辆行驶中承受着交变应力、力矩及变形力的作用,尤其是卡车下坡急刹车时,前轴承受卡车总负荷的70%以上,因此对前轴的强度和疲劳寿命有较高的要求。前轴形状比较复杂,截面起伏变化大,是一种锻造系数高的长轴类零件。采用精密辊锻-整体模锻工艺生产前轴,降低了模锻成形载荷,减少了模锻设备的投资
BCH码是一类重要的循环码,它有高效的编码和译码算法,因而有着广泛的应用。常循环BCH码是BCH码的发展和推广,它有着更灵活的参数和良好的代数结构,可以用于构造参数优良的量子纠错码。本文主要研究了有限域Fq2上一类码长为n=(q2m-1)/[r(q-1)]的λ-常循环BCH码,并利用该类常循环码构造了 一些参数较好的量子码,其中ord(λ)=r,r|(q+1),q是素数幂。具体研究内容如下:一、根
地质遗迹是由地质内力和外力共同作用形成、发展和保存下来的、珍贵且不可再生的自然产物。其中,层型剖面和古生物群两类遗迹对于探讨生物与环境之间的关系、恢复古地理演变、追溯古板块的分离聚合等均具有十分重要的科学意义。安徽省地质遗迹丰富,其地层剖面和古生物群有显著的代表性,受到广泛关注。基于此,本文选择了安徽省境内出露较为重要的77条不同地质年代的层型剖面与46个古生物群化石进行了综合评价。从价值与功能、
新生代基性岩浆事件是中国东部的关键地质进程之一,对认识区域构造演化及其动力学过程具有重要意义。苏北盆地北靠苏鲁造山带,西接张八岭隆起带,东望滨太平洋俯冲带,且紧邻华北与华南板块的构造边界,是中国东部构造位置最为特殊的新生代盆地。盆地内广泛发育的新生代辉绿岩和玄武岩,记录了该期区域基性岩浆事件的丰富信息。本次工作选择苏北盆地内岩浆活动最强烈的高邮凹陷为研究对象,选取其中代表性的基性岩岩芯样品,开展锆
乙烯信号通路相关基因被认为具有调控多种胁迫响应的功能。在植物耐硒(Se)胁迫的研究中,发现拟南芥在Se诱导下,乙烯响应因子(ethylene response factor,ERF)ERF96基因的表达水平明显升高,然而ERF96基因调控硒胁迫应答的分子机制仍未知,因此本论文对此展开深入探讨。1.构建ERF96过表达载体并获得了拟南芥ERF96基因的过表达植株。用特异引物PCR扩增ERF96编码区
由于能源问题和环境问题日益严重,作为大气污染物主要来源汽车尾气也受到日益严格的排放法规限制。纯氧燃烧技术是一项非常具有应用前景的清洁燃烧技术,同时研究人员提出在纯氧燃烧过程中引入水蒸气,并将其应用在发动机中,能够有效降低污染物排放和火焰温度,提高循环热效率。同时由于天然气发动机具有较好的排放性能,受到了越来越多的重视。目前该技术成功应用在涡轮机发电领域,但是在内燃机领域鲜有涉及。为将该技术广泛应用
软件开发方法是对系统化的软件构造过程与技术的总结,在对于如何设计出高质量的软件方面具有重要指导作用。现代企业Web系统中,面向对象方法和分层架构被广泛使用。然而在面向对象时,大多面向的是数据与行为分离的贫血对象,导致对象沦为数据容器,行为逻辑散落在业务层中。这种开发方式随着企业规模扩展和系统体量增加,将会造成逻辑层代码臃肿,代码的可维护性和可扩展性变差等问题。领域驱动设计(Domain-Drive
百年来由中国共产党带领各族人民走出的独具中国特色的卫生健康治理之路,构建起了以四类卫生法律法规为主体的公共卫生健康法律体系,成就举世瞩目。建党百年,我国卫生健康治理连“点”成“线”、合“线”为“面”、立“面”为“体”,卫生健康治理理念提档升级,治理手段更新优化,治理能力有效提升,形成了崭新的卫生健康治理格局。在这百年卫生健康治理探索与实践的辉煌历程中,秉持实事求是理念,毫不动摇地坚持中国共产党领导
生物炭在环境修复领域被广泛研究,生物炭中的磷作为一种不可再生的营养元素而备受关注。而生物炭中的水溶性磷释放到水环境中,会导致水体富营养化,进而危害生态系统健康,同时造成磷资源浪费。为此,本文以农业废弃秸秆为研究对象,探索了秸秆生物炭中水溶性磷在环境中的释放规律;以不同富铁矿石(褐铁矿、菱铁矿和磁铁矿)为前驱体,在600℃氢气气氛下焙烧制备零价铁(ZVI),研究了 ZVI对磷的富集作用和反应机理;在