论文部分内容阅读
本研究以朗德鹅、江山白鹅、浙东白鹅、永康灰鹅和莱茵鹅五个鹅种共132只个体为供试群体,针对MC4R、LPL、PPARy和ApoB基因在其他动物中已经发现的多态位点,设计引物,利用PCR-SSCP技术,在群体内研究了上述基因在各个体中的SNPs及其与肉质和屠体性状的关联性。研究结果对于阐明鹅肥肝形成机理、动物肥胖机理、鹅脂类代谢及育种改良等均具有重要意义。另外,还进行了朗德鹅填饲前后MC4R基因在各组织中表达模式的研究。应用强制填饲技术建立腹型肥胖朗德鹅模型,提取填饲后及正常朗德鹅新鲜腹脂、肝脏等13处组织的总RNA, SYBR Green I荧光定量PCR法检测各组织MC4R基因的表达,选择β-actin作为内参基因,使用半定量2-△△CT法分析结果。结果显示如下：1鹅MC4R、LPL、PPARy和ApoB基因多态性与屠体、肉质性状相关性研究PCR-SSCP结果表明,在本实验所有鹅个体中,除了PPARy基因所扩增出片段中没有发现SNPs外,其他基因均发现SNPs存在。它们分别是：SNPs-MC4R128(G→A)、 SNPs-LPLexton3-246(G→A)、SNPs-apoB4507(A→G)。其中,SNPs-MC4R128(G→A)检测到两种基因型AA型和BB型,SNPs-LPLexton3-246(G→A)检测到3中基因型HH型、Hh型及hh型,SNPs-apoB4507(A→G)中也检测到三种基因型YY型、Yy型及yy型。最小二乘分析和显著性检验表明：在屠体性状方面,SNPs-MC4R128位点BB型的胸肌率和腿肌率均极显著高于AA型个体(P<0.01)。SNPs-LPL exton3-246位点hh型个体胸肌率、屠宰率和活重均极显著高于HH型个体(P<0.01)；HH型个体腹脂率极显著低于hh型个体(P<0.01),Hh型腹脂率显著低于hh型(P<0.05)；SNPs-apoB4507位点YY基因型胸肌率和腿肌率均显著低于Yy型(P<0.05),且极显著低于yy基因型个体(P<0.01)；YY、Yy型个体活重和腹脂率均极显著低于yy型(P<0.01)；YY型个体的屠宰率指标也同样极显著低于yy型(P<0.01)。在肉质性状方面,SNPs-MC4R128位点AA型个体十五碳烯酸、棕榈油酸、硬脂酸、油酸及二十碳烯酸含量极显著高于BB型个体(P<0.01),亚麻酸含量显著高于BB型个体(P<0.05),而AA型个体豆蔻酸、十五烷酸、棕榈酸、亚油酸、花生四烯酸、山嵛酸、芥酸含量极显著低于BB型个体的含量(P<0.01)。SNPs-LPL exton3-246多态位点对应的三种基因型中,HH型和Hh型个体月桂酸含量极显著高于hh型个体(P<0.01)；HH型个体豆蔻酸含量极显著高于hh型个体(P<0.01),而Hh型个体豆蔻酸含量显著高于hh型个体(P<0.05)；HH型个体十五烷酸、十五碳烯酸含量均极显著低于hh型个体(P<0.01)；HH型和Hh型个体棕榈酸含量显著高于hh型(P<0.05),而十七碳烯酸的结果恰好与棕榈酸相反；对于硬脂酸,Hh型个体含量显著低于hh型(P<0.05)；对于油酸,HH型个体含量显著低于hh型个体(P<0.05)；HH型个体亚麻酸含量极显著高于hh型(P<0.01),Hh型个体的含量显著高于hh型(P<0.05)；对于花生酸,HH型个体含量极显著高于hh型个体含量(P<0.01)；对于粗脂肪含量来说,HH型个体粗脂肪含量显著高于hh型个体(P<0.05)。SNPs-apoB4507多态位点三种基因型中,YY型个体月桂酸和花生酸含量均极显著高于yy型个体(P<0.01)；YY型个体豆蔻酸含量显著高于yy型个体(P<0.05)；YY型个体十五烷酸显著低于yy型个体含量(P<0.05)；对于十五碳烯酸,YY型个体显著高于Yy型(P<0.05),并且极显著高于yy型个体(P<0.01)；对于棕榈酸,YY型个体显著低于yy型个体(P<0.05)；YY型个体棕榈油酸含量显著低于Yy和yy型(P<0.05)；对于硬脂酸,YY和Yy型个体含量均显著高于yy型个体(P<0.05)；对于亚麻酸,YY型个体显著高于Yy型(P<0.05),且极显著高于yy型(P<0.01)；对于二十碳烯酸和花生四烯酸,YY型个体含量显著低于Yy型(P<0.05),且极显著低于yy型个体(P<0.01)；YY型山嵛酸含量显著低于yy型个体(P<0.05)；而在芥酸含量方面,YY型和Yy型个体均极显著低于yy型个体(P<0.01)。综上所述,可考虑将MC4R、LPL及ApoB基因作为影响鹅肉质和屠体性状的候选基因。2SYBR Green I荧光定量PCR法检测朗德鹅填饲前后MC4R基因表达情况PCR结果显示,MC4R基因及β-actin在填饲前后朗德鹅心脏、肝脏、脾脏、肺、肾脏、肌胃、小肠、胰腺、脑、胸肌、腿肌、腹脂、皮下脂等13种组织中均存在不同程度表达。SYBR Green I荧光定量PCR结果表明：在肾、小肠、心这3个组织中,填饲后朗德鹅MC4R表达量均比对照组中朗德鹅该基因表达量低,填饲后分别为填饲前表达量的0.41±1.80、0.65±5.75及0.72±1.22倍。而在其他组织中,MC4R基因表达量均有不同程度的增加,填饲组/对照组相对表达量倍数由高到低顺序分别为：脑22.78±1.00倍,肝9.08±2.80倍,肺5.28±1.83倍,胰3.78±3.01倍,腿肌3.07±3.64倍,胃2.90±0.97倍,皮下脂肪2.34±1.66倍,腹脂2.18±3.01倍,胸肌2.07±0.37倍,脾2.01±1.75倍。