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目的通过研究肝癌细胞来源的外泌体诱导PD-1的表达调控CD4~+、CD8~+T细胞的功能,以此探讨肝癌细胞来源的外泌体与肝癌免疫功能的关系,为临床上肝癌的免疫治疗提供理论依据。方法收集肝癌患者(华北理工大学附属医院2016.12-2018.05已经确诊的肝癌患者52例,男28例,女24例,平均年龄61.22±7.29岁)和健康对照组(华北理工大学附属医院2016.12-2018.05健康体检者60例,男32例,女28例,平均年龄为60.68±7.38岁)外周血各3mL,空腹抽血,通过流式细胞术检测分析肝癌患者和健康对照组外周血中CD4~+、CD8~+T细胞的数量差异,同时分析肝癌患者和健康对照组外周血中CD4~+、CD8~+T细胞PD-1表达的差异;运用q-PCR技术来检测肝癌患者和健康对照组外周血中CD4~+、CD8~+T细胞的IFN-γ的mRNA表达情况;体外培养Huh-7肝癌细胞并提取上清液,采用沉淀法收集外泌体,透射电镜和Nanosight进行外泌体形态和浓度粒径分布的检测;收集健康捐赠者外周血30mL,流式细胞术分选CD4~+、CD8~+T细胞并培养,加入外泌体共同作用5天后,分离细胞提取蛋白,Western-blot检测CD4~+、CD8~+T细胞中PD-1的蛋白表达。采用SPSS 22.0统计软件分析,数据方差齐,组间比较用t检验,P<0.05提示差异有统计学意义。结果肝癌患者与健康人对比,性别、年龄无统计学差异。对肝癌患者和健康组外周血进行流式检测发现肝癌患者外周血中CD4~+及CD8~+T细胞数量(25.87±3.91%、14.81±3.34%),与健康组(28.28±3.96%、16.12±2.82%)比较,差异无统计学意义(P>0.05)。同时检测发现在肝癌患者外周血中表达PD-1的CD4~+及CD8~+T细胞数量分别为8.32±1.81%、9.38±1.72%,高于健康组2.57±0.99%、2.75±1.08%,差异有统计学意义(P<0.05)。分选肝癌患者和健康组外周血CD4~+、CD8~+T细胞,提取RNA,进行q-PCR检测,发现肝癌患者外周血中CD4~+、CD8~+T细胞IFN-γ的mRNA表达量分别为0.74±0.12、0.67±0.10,低于健康对照组表达量1.11±0.14、1.18±0.12,差异有统计学意义(P<0.01)。分选出健康人外周血CD4~+PD-1~-、CD8~+PD-1~-T细胞。提取体外培养的Huh-7肝癌细胞上清液,用沉淀法收集外泌体,透射电镜发现中凹圆盘状的外泌体大量分布,同时nanosight检测显示外泌体平均粒径约150nm。外泌体与分选出的CD4~+PD-1~-、CD8~+PD-1~-T细胞共同作用后,分离T细胞提取蛋白,Western-blot检测可得两种细胞表面PD-1的蛋白表达量分别为5.12±0.18、4.28±0.52,高于对照组1.04±0.24、1.02±0.32,差异有统计学意义(P<0.01)。结论1肝癌患者外周血中的CD4~+、CD8~+T细胞与健康组相比数量无明显变化。2肝癌患者外周血中的CD4~+、CD8~+T细胞IFN-γ表达与健康组相比,明显降低。3肝癌患者外周血中CD4~+、CD8~+T细胞PD-1的表达显著增加。4肝癌细胞来源的外泌体诱导CD4~+、CD8~+T细胞PD-1的表达显著增加。图6幅;表6个;参182篇。