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第一部分VEGF和VEGFR2在前列腺癌中的表达及相关性 目的: 收集临床组织标本研究血管内皮生长因子(VEGF)和磷酸化血管内皮生长因子受体2(p-VEGFR2)的表达及与前列腺癌分级分期的关系。 方法: 收集35例经病理诊断为前列腺癌的组织标本和18例癌组织标本,免疫组织化学技术(IHC)检测VEGF和p-VEGFR2的表达,显微镜下观察并拍照,采用IPP6.0软件进行图像分析并计算平均光密度值。统计学分析VEGF和p-VEGFR2在前列腺癌中的表达及与临床病理参数的关系和相关性。 结果: VEGF及p-VEGFR2在前列腺癌组织中表达量显著高于对应癌旁正常前列腺组织(P<0.01)。VEGF及p-VEGFR2蛋白表达水平与前列腺癌病理分期有关(P<0.01)但与病理分级无关(P>0.05);统计学分析显示VEGF与p-VEGFR2的表达量呈正相关性(r=0.865,P<0.01)。 结论: VEGF及p-VEGFR2在前列腺癌中高表达且密切相关,为进一步探讨两者在前列腺癌发生发展中的作用提供理论依据。 第二部分 miR-29c,VEGF和p-VEGFR2在正常前列腺上皮细胞及前列腺癌细胞PC3中的表达 目的: 检测正常前列腺上皮细胞(RWPE-1)与前列腺癌细胞(PC3)中miR-29c,VEGF和p-VEGFR2表达情况。 方法: 常规培养RWPE-1及PC3细胞株,24h后分别提取两种细胞RNA与蛋白质。Q-PCR检测miR-29c,VEGF,VEGFR2的表达,Western-Blot检测VEGF,VEGFR2,p-VEGFR2的表达。 结果: 与RWPE-1相比PC3细胞中 miR-29c的表达显著降低,VEGF,VEGFR2及p-VEGFR2的表达显著升高,差异具有统计学意义(P<0.01). 结论: PC3细胞中miR-29c,VEGF,VEGFR2的表达与RWPE-1中存在显著差异,为后续实验奠定了基础。 第三部分 miR-29c下调VEGF/VEGFR2信号通路促进前列腺癌细胞凋亡 目的: 研究过表达miR-29c在前列腺癌细胞中对VEGF/VEGFR2信号通路的调节作用及其对细胞凋亡的影响。 方法: 生物信息学软件预测miR-29c与VEGF的靶向结合区域;Western-Blot检测过表达miR-29c后PC3细胞VEGF,VEGFR2和p-VEGFR2及凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达情况;细胞免疫荧光(IF)检测p-VEGFR2在PC3细胞中的定位;hoechst33258染色法检测PC3细胞凋亡,流式细胞术(FCM)检测PC3细胞早期凋亡率。统计学方法分析实验结果。 结果: PC3细胞过表达miR-29c显著降低VEGF,p-VEGFR2,Bcl-2的蛋白表达(P<0.01),Bax的表达显著升高(P<0.001),细胞凋亡与早期凋亡率显著增加(P<0.001)。细胞免疫荧光结果显示p-VEGFR2广泛存在于PC3细胞的细胞膜,细胞质及细胞核中。 结论: 过表达miR-29c能够靶向降解VEGF的表达从而降低p-VEGFR2进而促进前列腺癌PC3细胞株的凋亡。