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本试验拟从体内和体外两个方面来探讨艾蒿水提物(AAE)是否能缓解脂多糖(LPS)诱导的肉仔鸡的免疫应激以及可能的作用机制。主要研究内容及结果如下:肉仔鸡饲养试验探究了AAE对LPS诱导的肉仔鸡生长性能、免疫和抗氧化功能的影响以及产生作用的分子机理。采用2×2二因素试验设计,主效应包括日粮处理(添加0或1000mg/kg AAE)和应激处理(注射LPS或等量的生理盐水)。96只1日龄爱拔益加肉仔鸡被随机分为2个处理,每个处理6个重复(8只鸡/重复)。于试验第14、16、18和20天时,给每个处理组中一半肉仔鸡腹腔注射5mL/kg体重LPS溶液(LPS用生理盐水配制成100 μg/mL的溶液),另一半注射等量生理盐水。试验期为28 d,分为预饲期(d1-14)、应激期(d15-21)和恢复期(d 22-28)。结果显示:(1)日粮中添加AAE显著缓解了应激期肉仔鸡体重(d21)、采食量和平均日增重的下降;抑制了 LPS刺激引起的血清促肾上腺皮质激素和皮质酮浓度的升高,提高了生长激素的水平。(2)饲喂AAE显著提高了肉仔鸡的胸腺指数,但是抑制了由于LPS刺激引起的脾脏指数的升高;显著抑制了由于LPS刺激引起的肉仔鸡血清中IL-2、IL-6、TNF-α、NO、IgG含量和iNOS活性的升高;显著降低了肉仔鸡血清MDA含量,提高了血清中CAT和GSH-Px含量。(3)日粮中添加AAE降低了LPS刺激肉仔鸡不同体组织中 TLR4、MyD88、NF-κB、IL-1β、IL-6、TNF-α和iNOS 的基因表达量,从而降低了炎性细胞介质的释放;提高了免疫应激肉仔鸡组织中CAT、SOD和GSH-Px的基因表达量,促进了肉仔鸡的抗氧化能力。体外法首先研究了艾蒿多糖(AAP)对肉仔鸡外周血淋巴细胞(PBLs)免疫和抗氧化功能的影响及其分子机制。试验先采用2×5两因素设计,包括LPS刺激(0或10μg/mL)和AAP水平(0、25、50、100和200μg/mL),共10个处理(6个重复/处理),通过研究不同浓度的AAP对PBLs免疫和抗氧化功能的影响来筛选AAP的最适添加量;然后采用2×2×2三因素设计,包括LPS刺激水平(0或10 μg/mL)、AAP添加水平(添加或不添加,添加剂量依据前述筛选试验决定)和PDTC(NF-κB抑制剂)水平(0或10 μmol/mL),试验共设8个处理,每个处理6个重复。通过抑制NF--κB信号通路来研究AAP的抗炎机制。结果显示:(1)正常培养条件下,AAP可以提高PBLs培养液中IL-1β、IL-6、TNF-α、NO的含量和T-AOC,同时提高了PBLs中相应的基因表达,但对TLR4/NF-κB信号通路并无显著影响;在LPS刺激下,添加AAP抑制了培养液中IL-1β、IL-6、TNF-α、NO和IgG的含量以及iNOS活力的升高,增强了 SOD的活力和T-AOC,从分子结果来看,AAP下调了由于LPS刺激引起的TLR4、MyD88、NF-κB、IL-1β、IL-6、TNF-α和iNOS基因表达的升高,同时也提高了 SOD的基因表达。(2)正常培养条件下,AAP显著提高了PBLs培养液中TNF-α的含量和T-AOC;在LPS刺激下,PDTC或AAP都分别不同程度地下调了TLR4和NF-κB的基因表达,进而缓解了炎性细胞介质的过度表达;在PDTC存在时再添加AAP时发现,AAP对TLR4/NF-κB信号通路以及炎性细胞介质的表达没有显著影响,但SOD的基因表达却显著升高了。这提示AAP可以通过调节TLR4/NF-κB信号通路来发挥其抗炎免疫作用,且AAP的抗氧化作用也可能促进了其抗炎、抗应激作用。其次研究了艾蒿去多糖水提物(RAAP)对肉仔鸡PBLs免疫和抗氧化功能的影响及其机制。试验流程与AAP试验相同。结果显示:(1)正常培养条件下,RAAP显著提高了PBLs培养液中IL-6含量、SOD活性和T-AOC;在LPS刺激条件下,RAAP可以降低PBLs培养液中IL-6、TNF-α和iNOS的水平;且提高了GSH-Px、SOD的活力和T-AOC,降低了 MDA的含量。基因表达结果表明,RAAP降低了由于LPS刺激引起的NF-κB、IL-6、TNF-α、iNOS基因表达的升高,同时也提高了GSH-Px和SOD的基因表达。(2)RAAP对正常培养条件下PBLs的免疫功能无显著的影响,但却显著提高了其抗氧化活性。在LPS刺激PBLs后,单独添加RAAP或PDTC都不同程度地抑制NF-κB、IL-6、TNF-α、NO和iNOS的基因表达水平;另外,RAAP显著提高了SOD的活性和T-AOC。在PDTC存在下,再添加RAAP对NF-κB以及下游炎性细胞介质的水平并无显著影响,但却显著提高了PBLs的T-AOC。这提示RAAP的抗炎机制与其抗氧化活性有关,RAAP提高了PBLs的抗氧化活性,从而增强了培养液中ROS的清除能力,ROS含量的降低抑制了NF-κB的活性,下调了下游炎性细胞介质的表达。