【摘 要】
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凝聚体是细胞中存在的无膜细胞器,也被用于模拟原始细胞。膜融合是细胞中普遍存在的过程,具有重要的生理功能。通过融合肽、电击穿以及静电相互作用均可实现磷脂囊泡的膜融合
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凝聚体是细胞中存在的无膜细胞器,也被用于模拟原始细胞。膜融合是细胞中普遍存在的过程,具有重要的生理功能。通过融合肽、电击穿以及静电相互作用均可实现磷脂囊泡的膜融合。本论文利用不同电性的囊泡通过静电相互作用使其发生膜融合,融合后两个腔室变成一个,导致各室的物质发生混合,在融合后的囊泡内部生成凝聚体。通过调节聚(二烯丙基二甲基氯化铵)(PDDA)与三磷酸腺苷(ATP)的浓度和比例,制备出不同尺寸的凝聚体。由ATP:PDDA=1:4(PDDA=80 m M)制备的凝聚体,尺寸较大便于观察可作为化学反应的隔室。由ATP:PDDA=1:16或1:2(PDDA=80m M)制备的凝聚体尺寸较小,可在囊泡内生成。凝聚体与带正电荷的囊泡发生静电相互作用,使囊泡在凝聚体内部聚集。进而在凝聚体内部实现了酶的级联反应:葡萄糖在葡萄糖氧化酶(GOx)的作用下生成过氧化氢,过氧化氢在辣根过氧化物酶(HRP)的作用下将Amplex Red氧化生成具有红色荧光的试卤灵分子。利用1,2-二月桂酰-sn-甘油-3-胆碱磷酸(DLPC)/二油酰基磷脂酰丝氨酸(DOPS)制备出巨型磷脂囊泡(Giant unilamellar vesicles,GUVs)。利用1,2-二油酰基磷脂酰胆(DOPC)/(2,3-二油酰基-丙基)-三甲胺(DOTAP)(1:X mg/mg)制备出小尺寸单层磷脂囊泡(Small unilaminar vesicles,SUVs),其中DOTAP是带正电的磷脂。DOTAP的掺杂质量比例(DOTAP:DOPC)分别为0.1:1,0.15:1,0.35:1,1:1。发现在以上条件下,SUVs均可与GUVs发生膜融合。接下来拟在GUVs中载入ATP,SUVs中载入PDDA,通过囊泡融合在最终囊泡中制备凝聚体。由于新冠疫情后续无法返校完成相关实验。
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