【摘 要】
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目的:构建超负荷细胞模型,验证高强度拉伸应力对羊颞下颌关节盘（temporomandibular joint disc,TMJ disc）细胞的促凋亡作用。继而探究白藜芦醇（resveratrol,RSV）是否可逆转高强度应力下TMJ disc细胞的凋亡,最终实现抗凋亡作用。实验设计:选取新鲜的3月龄羊头,体外分离并培养TMJ disc细胞,传至第三代。随后,将TMJ disc细胞接种于硅胶膜小室
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目的:构建超负荷细胞模型,验证高强度拉伸应力对羊颞下颌关节盘（temporomandibular joint disc,TMJ disc）细胞的促凋亡作用。继而探究白藜芦醇（resveratrol,RSV）是否可逆转高强度应力下TMJ disc细胞的凋亡,最终实现抗凋亡作用。实验设计:选取新鲜的3月龄羊头,体外分离并培养TMJ disc细胞,传至第三代。随后,将TMJ disc细胞接种于硅胶膜小室,应用体外细胞加力系统（B-Bridge细胞牵拉仪）对细胞施加单轴周期性拉伸应力,分为空白对照组（0%拉伸应变率）和2%、4%、8%加力组（参数:0.5Hz,1h/d,3d）,免疫荧光染色观察细胞骨架的变化,CCK-8法和流式细胞仪分别检测细胞增殖水平和凋亡率,初步验证8%拉伸可作为高强度应力促进细胞的凋亡。继而应用不同浓度的RSV（0、2.5、5、7.5、10、20μM）处理TMJ disc细胞,CCK-8法筛选出RSV干预的最适浓度。然后将实验组分为空白组、RSV组、2%加力组、2%+RSV组、8%加力组和8%+RSV组,应力作用3d,每天1h,使用CCK-8法、Hoechst 33259染色和流式细胞仪检测细胞增殖和凋亡情况,RT-q PCR检测Bcl-2、Bax和Caspase-3基因表达量。应用配对t检验和单因素方差分析（oneway ANOVA）分析数据。主要结果:1.不同拉伸应力对细胞形态、增殖、凋亡的影响:免疫荧光染色显示2%加力组的纤维骨架拉长,有完整纤维网状结构;4%加力组的细胞骨架出现解离的表现,且有一定程度的变形;8%加力组的纤维骨架拉长极为明显,并出现纤维断裂。CCK-8结果显示2%拉力可促进细胞增殖（P＜0.01）,而8%拉力明显抑制细胞增殖（P＜0.01）。流式细胞仪结果显示8%拉力下细胞凋亡率增高得最为明显（P＜0.01）。综上所述,8%拉伸应力已超过正常的生理范围,可用于构建高强度应力模型。2.RSV干预的最适浓度:CCK-8结果显示RSV的浓度在2.5-7.5μM范围内促进细胞增殖;RSV浓度≥10μM时,抑制细胞增殖。在8%拉力下,7.5μM的RSV促进细胞增殖的能力最高。因此,使用7.5μM的RSV用于以下实验。3.8%拉力下RSV对细胞增殖和凋亡的影响:CCK-8结果显示与8%加力组相比,8%+RSV组细胞增殖力明显增高（P＜0.05）。Hoechst 33259染色结果显示空白对照组和2%加力组有少量的细胞凋亡,而8%加力组出现明显的细胞凋亡现象。同8%加力组比较,8%+RSV组的凋亡细胞明显减少（P＜0.05）。这与流式细胞仪检测的细胞凋亡率基本一致。4.PCR检测Bcl-2、Bax、Caspase-3基因表达结果:与对照组相比,8%加力组Bcl-2表达降低（P＜0.05）,Bax表达增高（P＜0.01）,Caspase-3表达增高（P＜0.05）。相比8%加力组,8%+RSV组Bcl-2表达升高（P＞0.05）,Bax表达降低（P＜0.05）,Caspase-3表达降低（P＜0.05）。结论:1.8%拉伸应力作为高强度应力模型,显著促进羊TMJ disc细胞的凋亡;2.RSV能有效地通过线粒体途径逆转高强度拉伸应力下羊TMJ disc细胞的凋亡。
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