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禽流感病毒(AIV)属正粘病毒科,单股负链的RNA病毒。近年来,不断出现禽流感病毒感染人的新亚型。目前可感染人的AIV包括H5N1、H6N1、H7N2、H7N3、H7N7、H7N9、H9N2、H10N7和H10N8,其中H10N8、H7N9、H6N1是2013年首次发现的可感染人的AIV亚型。禽流感病毒(AIV)在世界范围内尤其在亚洲广泛流行,给养禽业造成了巨大的经济损失,同时对人类的公共卫生安全也产生了一定的威胁。1965年利H10N8亚型AIV首次在意大利的鹌鹑体内被分离到,中国第一次分离到H10N8亚型AIV是在2007年洞庭湖水样调查中,在2012年在广东省的鸭体内同样分离到了该病毒。2013年12月中国江西省发生了首例H10N8亚型禽流感病毒感染人的病例,在此之前H10N8亚型禽流感的遗传背景还不清晰。为此本实验室进行了相关研究。2013年12月本实验室在感染H10N8的患者及活禽交易市场分离了三株H10N8禽流感病毒株,分别是A/Jiangxi-Donghu/346-1、A/Jiangxi-Donghu/346-2和A/chicken/Jiangxi/102/2013。本研究对这三个病毒株进行了遗传演化分析,推测了该病毒的起源,H10和N8首先在野鸟中发生重组,因为病毒的H10和N8都在鸭子当中分离到,所以最有可能是在野鸭中发生重组,继而在鸡体内与H9N2亚型流感病毒发生重组,并且通过重组获得了H9N2的内部基因。研究发现A/Jiangxi-Donghu/346-1、A/Jiangxi-Donghu/346-2和A/chicken/Jiangxi/102/2013三株病毒的HA、NA、PA、NP、M和NS基因具有相同的来源,且这三株毒的PB2、PB1、PA、NP、M和NS均来自鸡H9N2亚型禽流感病毒。流感病毒根据NA序列的不同可分为N1型和N2型,N1型包括N1、N4、N5和N8,N2型包括N2、N3、N6、N7和N9。本研究的N8属于N1型流感病毒,N1型流感病毒对奥司他韦的耐药突变通常在第275位发生由H到K的变化,对N1型流感病毒来讲在292位的耐药突变出现的情况比较少。同时本研究发现,在经奥司他韦治疗4天后,H10N8毒株NA片段第292位出现由R到K的耐药突变。反向遗传技术是相对于经典遗传技术而言的,就是对生物体从基因水平上进行操作,然后确定对生物体表型和性状的影响。病毒的反向遗传技术,通常被称为病毒拯救,是通过构建RNA病毒的感染性分析克隆,在DNA分子水平上对其进行体外操作,从而研究病毒结构与功能的方法。本研究利用RT-PCR扩增RNA病毒基因组的c DNA片段,然后利用利用限制性内切酶的酶切位点,将其克隆于p HW2000载体,获得基因组全长c DNA克隆,将其转染至293T细胞,全基因组c DNA在细胞内转录、复制并产生病毒的所有组分,最后包装成具有感染性的病毒离子。本研究成功建立H10N8亚型禽流感病毒的反向遗传系统,拯救出带有遗传标记的H10N8亚型禽流感毒株r346-1、r346-2和r102,并在SPF鸡胚中5代,测定重组病毒的遗传稳定性,成功获得能够稳定传代的重组H10N8亚型AIV,经验证重组病毒与原毒的HA、EID50等生物学特性一致。该系统后续对H10N8的研究搭建了科研平台。