系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus, SLE)是一种由多种自身抗体介导的慢性自身免疫病,血清抗核抗体(ANAs)的出现是该病的一个病变特征。SLE好发于女性,尤其是生育期的女性,其病变可累及多个器官,并出现不同程度的血管炎、肾小球肾炎和关节炎等多种临床表现,严重影响人类的健康。虽然随着治疗手段的进步,狼疮肾炎病人的二十年生存率被提高到了81%,但是狼疮肾炎患者的平均寿命短,生活质量也比正常人差。SLE发病机制的研究有助于为SLE疾病的缓解提供可能的治疗方法,从而提高SLE患者的生活质量水平。SLE病人的血清ANAs是针对自身核抗原成分抗体的简称,其中抗dsDNA抗体的出现对SLE疾病的诊断具有很高的特异性。研究表明：抗dsDNA抗体是引起免疫复合物(immune complex, IC)沉积和器官损伤的一个主要因素,并且血清抗dsDNA抗体的水平与SLE疾病的严重程度紧密相关。有研究表明自身核成分(例如DNA)可以诱导抗dsDNA抗体的产生：一般情况下,哺乳动物DNA的免疫原性比较弱,并不足以引起很强的免疫应答。因此寻找能够诱导抗dsDNA抗体的免疫原及其相关特性成为SLE研究领域中的一个关注焦点。我们的前期研究发现：活化淋巴细胞来源的凋亡DNA (activated lymphocyte-derived DNA, ALD-DNA)背部皮下免疫同系BALB/c小鼠能够诱导小鼠产生SLE疾病,其症状主要包括高水平抗dsDNA抗体的产生、肾脏免疫复合物的沉积和蛋白尿的产生,这些现象可以模拟SLE病人体内由凋亡DNA引起的SLE疾病症状；而非活化淋巴细胞来源的正常DNA (unactivated lymphocyte-derived DNA, UnALD-DNA)却不能诱导小鼠产生上述症状。在ALD-DNA诱导的SLE模型中,诱导疾病发生的自身免疫原明确,同时该模型还排除了基因突变等因素的干扰,因此ALD-DNA诱导的SLE模型是研究SLE疾病的理想动物模型。SLE的发病机制尚不明确,但目前的研究普遍认为：抗原提呈细胞(antigen presenting cell, APC)提呈体内不能被有效清除的自身核抗原物质,进而激活自身免疫反应,最终导致自身抗体的产生和组织的损伤。有很多组分参与并调节机体清除凋亡细胞和自身核抗原的过程,例如巨噬细胞和补体。有研究表明：补体成分水平低下或者功能缺陷与自身免疫病的发病相关。作为一种游离的模式识别分子(pattern recognition receptor, PPR),甘露糖结合凝集素(mannose-binding lectin, MBL)可以结合多种病原体表面的末端糖基成分,进而激活MBL依赖的补体活化途径,同时MBL还可以介导调理吞噬作用。因此MBL在调节机体抗感染等固有免疫过程中发挥着很重要的作用。有研究提示：SLE患者的血清MBL表达低下或者其功能存在一定的缺陷。但是MBL是否参与SLE疾病的发生还不是很明确。本研究的目的在于：(1)探究MBL在ALD-DNA诱导的SLE疾病中的表达水平及其与疾病的相关性；(2)通过细胞因子水平和细胞表型等的检测,探索MBL对ALD-DNA诱导的免疫反应的影响,并研究其相关的分子机制；(3)探索体内给予MBL处理能否缓解SLE症状,为SLE的防治提供可能的方法。第一部分：SLE中MBL的表达水平及其与SLE疾病的相关性分析有研究报道：SLE患者体内的淋巴细胞存在着持续过度凋亡的现象。大量DNA从未被及时清除的凋亡淋巴细胞中释放出来,超过机体的清除能力滞留体内。这些滞留体内的DNA构成SLE患者体内自身核抗原物质的主要来源。感染和应激等危险信号诱导的凋亡细胞也会释放DNA,但这些DNA并不会诱发自身免疫反应的产生。这些结果提示机体内必然存在着能够清除DNA的生理机制。MBL属于C型凝集素家族中的一员,是人体固有免疫系统的重要组成部分。除了具有结合病原物表面的糖成分和激活补体的能力外,MBL还可以通过与吞噬细胞表面的相关受体结合发挥免疫调理作用,促进凋亡细胞和细胞残片等的清除。有研究提示SLE患者的血清MBL水平低下或者其功能存在缺陷,但是MBL在SLE疾病中的作用还不清楚。我们前期的研究发现：ALD-DNA背部皮下免疫雌性BALB/c小鼠可以诱发SLE症状。为了研究MBL在SLE疾病中的作用,我们首先检测了ALD-DNA免疫小鼠血清中MBL的水平。我们发现：与对照组相比,ALD-DNA免疫小鼠的血清MBL明显下降。进一步的研究发现：ALD-DNA免疫小鼠的血清游离DNA显著升高；血清MBL与血清DNA的比值在ALD-DNA免疫小鼠中显著下降。更重要的是我们发现：ALD-DNA免疫小鼠的血清MBL水平与抗dsDNA抗体和尿蛋白的水平负相关。这些结果提示MBL在狼疮小鼠体内不足。总结以上结果我们发现：ALD-DNA免疫小鼠的血清MBL水平明显下降：ALD-DNA免疫小鼠的血清MBL水平与抗dsDNA抗体水平和尿蛋白水平呈负相关。第二部分：MBL对巨噬细胞极化的影响及其机制的研究我们的前期研究表明：ALD-DNA诱导的巨噬细胞M2b极化依赖于MAPK和NF-κB信号通路的活化,并且M2b巨噬细胞参与并促进SLE疾病的发生。这些研究结果提示：ALD-DNA诱导的M2b巨噬细胞是导致SLE发病的一个重要因素。作为小鼠体内的急性期反应(acute phase response)蛋白,MBL识别结合DNA的能力被证明的年限已经接近10年。最近又有研究表明：MBL在调节炎症反应的过程中也起着很重要的作用。但是MBL与DNA的结合是否会影响吞噬细胞对DNA的吞噬以及DNA诱导的免疫反应还尚不清楚。我们的研究表明：MBL与ALD-DNA的结合呈剂量依赖性,并且MBL结合ALD-DNA后能够促进巨噬细胞对ALD-DNA的吞噬。为了研究MBL与ALD-DNA的结合是否会影响ALD-DNA诱导的巨噬细胞极化,我们分别检测了细胞因子的分泌和iNOS的表达水平,结果发现MBL可明显下调TNF-α、IL-6和MCP-1的表达,但是却可显著增强IL-10的表达。进一步的研究表明：MBL可以明显地抑制iNOS的表达。这些结果提示：MBL可调节巨噬细胞朝M2b方向极化。更重要的是我们发现：MBL对巨噬细胞极化的调节依赖于MAPK和NF-κB信号通路的抑制和CREB的活化。作为APC,巨噬细胞能够诱导Thl和Th17细胞的生成,从而进一步加重SLE疾病。进一步的研究发现：MBL可以显著下调ALD-DNA刺激的巨噬细胞诱导T细胞分化的能力。总结以上结果我们发现：通过抑制MAPK和NF-κB信号通路同时增强CREB的活化,MBL可以调节M2b巨噬细胞的极化；巨噬细胞诱导T细胞分化为Thl和Th17细胞的能力可被MBL所抑制。第三部分：MBL对SLE的干预作用我们前期的研究提示：抑制M2b巨噬细胞的极化可以缓解ALD-DNA诱导的SLE疾病。除了巨噬细胞,Th1和Th17细胞在SLE发病中也起着很重要的作用。我们第二部分的研究结果证明：MBL可以调节M2b巨噬细胞极化和T细胞的分化,因此我们假设MBL体内干预可以缓解ALD-DNA诱导的SLE疾病。我们将pMBL和pcDNA3.1肌肉注射ALD-DNA免疫小鼠。结果显示：MBL处理也可以调节肾脏巨噬细胞的极化。抗dsDNA抗体水平、肾脏免疫复合物沉积、尿蛋白水平和肾脏病理损伤的分析结果显示：MBL治疗可以明显缓解ALD-DNA诱导的狼疮肾炎。总结以上结果我们发现：MBL处理可以调节巨噬细胞的极化并且能够缓解小鼠的狼疮肾炎。