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背景胃癌是世界范围内死亡率第三位的恶性肿瘤。中国是世界上胃癌发病率最高的国家之一,其病死率居恶性肿瘤的第三位,严重威胁人类的生命与健康。正常分化的细胞主要通过有氧氧化功能,与之相比,肿瘤细胞以有氧糖酵解作为主要的供能方式(瓦伯格效应)。丙酮酸激酶(pyruvate kinase, PK)是催化糖酵解最后一步反应的关键酶,它将磷酸烯醇式丙酮酸分解成为丙酮酸。PK在体内有四种活性形式,其中PKL和PKR由同一基因PKLR编码,通过不同的组织特异性启动子分别表达于肝脏和红细胞中。而PKM1主要表达于骨骼肌和脑组织,PKM2主要表达于胚胎组织及增殖的细胞,尤其是肿瘤细胞中。PKM2主要以2种形式存在,即高活性的四聚体形式和低活性的二聚体形式。四聚体型存在于分化的组织和正常增殖的细胞中,而二聚体型存在于肿瘤细胞中,与底物亲和力低,促使肿瘤细胞内糖代谢中间体如磷酸烯醇类物质等累积,它将糖酵解途径阻断在丙酮酸上游,使中间产物聚集,促进大分子物质合成,有利于肿瘤生长,对肿瘤细胞的增殖及血管新生具有重要作用。miR-let-7a是早期发现的一种miRNA,也是线虫时序性发育的关键性调控因子,其不仅在哺乳动物中调节细胞增殖、凋亡,也在细胞周期调节中起关键作用,对包括胃癌在内的多种恶性肿瘤都有抑制作用。我们拟通过从let-7a入手,分析其在胃癌细胞中与PKM2可能的作用机制,研究let-7a/PKM2通路参与胃癌细胞发生发展的分子生物学机制。目的明确let-7a和PKM2在胃癌组织及细胞中的表达差异及相关性,重点探讨let-7a调控PKM2对胃癌细胞株增殖、迁徙和转移能力的影响及相关分子机制,分析let-7a/PKM2通路在胃癌细胞生长中的作用,其结果将有助于进一步了解let-7a/PKM2信号通路在胃癌生长过程中的作用和分子机制,对探索非编码RNA在胃癌发病机制与信号通路的交互调控作用有重要意义,可能为未来胃癌分子治疗提供新思路。方法1、在人类胃癌组织和癌旁组织以及胃癌细胞株中测定let-7a和PKM2表达水平,并进行病理特征分析。2、分别构建let-7a过表达和干扰慢病毒表达系统,收获重组慢病毒感染胃癌细胞株。实时定量PCR、western blot明确let-7a的过表达和干扰后,下游c-Myc, hnRNPA1和PKM2的含量变化,CCK-8, Transwell迁徙和转移等细胞功能实验检测let-7a对胃癌细胞增殖和迁徙转移能力的影响。3、分别构建PKM2过表达和干扰慢病毒表达系统,收获重组慢病毒干扰胃癌细胞株。4、实时定量PCR、western blot明确PKM2的过表达和干扰后,上游let-7a, c-Myc和hnRNPA1的含量变化,CCK-8, Transwell迁徙和转移等细胞功能实验检测PKM2对胃癌细胞增殖和迁徙转移能力的影响。5、裸鼠体内实验进一步验证let-7a/PKM2通路对胃癌细胞增殖和迁徙转移能力的影响。结果1、胃癌组织和胃癌细胞中let-7a表达与PKM2表达呈负相关；2、let-7a通过调节c-Myc, hnRNPA1的表达进而影响胃癌细胞中PKM2表达；3、let-7a抑制胃癌细胞增殖以及迁徙转移能力；4、let-7a最终是通过影响PKM2表达抑制胃癌细胞增殖和迁徙转移能力；5、裸鼠实验在体内水平证实let-7a/PKM2通路对胃癌生长能力的抑制作用。结论Let-7a通过影响c-Myc和hnRNPA1最终降低PKM2表达从而抑制胃癌细胞的生长与侵袭迁徙能力。