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目的:本研究拟通过离体实验,使用等效镇痛剂量吗啡和舒芬太尼预处理人肺腺癌A549细胞,观察和比较吗啡和舒芬太尼对A549细胞增殖和凋亡的影响,并对其可能机制进行初步讨论,同时可为肿瘤患者围术期镇痛药物的使用提供依据。方法:离体培养人肺腺癌A549细胞,取对数生长期的细胞接种于培养板,使用随机数字表法将A549细胞分为:对照组,10μg/mL吗啡组,20μg/mL吗啡组,40μg/mL吗啡组,0.01μg/mL舒芬太尼组,0.02μg/mL舒芬太尼组,0.04μg/mL舒芬太尼组。各组细胞加入相应浓度药物后继续培养48小时,采用光学倒置显微镜观察药物处理后的细胞数目和形态,用CCK-8法和细胞平板克隆形成实验观察细胞的增殖以及单细胞克隆形成能力,使用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,采用Western blot法检测凋亡相关蛋白P53、Bcl-2和Bax的表达水平。结果:1、吗啡和舒芬太尼对A549细胞数目和细胞形态的影响:使用光学倒置显微镜观察不同浓度吗啡(10、20、40μg/mL)和舒芬太尼(0.01、0.02、0.04μg/mL)预处理A549细胞48小时后发现,与对照组相比,使用吗啡和舒芬太尼处理后的细胞细胞数明显减少,细胞轮廓不规则,细胞出现明显的凋亡特征。尤其是0.04μg/mL的舒芬太尼对A549的增殖呈明显的抑制作用。2、吗啡和舒芬太尼对A549细胞增殖情况的影响:使用CCK-8法检测不同浓度吗啡(10、20、40μg/mL)和舒芬太尼(0.01、0.02、0.04μg/mL)预处理A549细胞48小时后的细胞增殖情况,结果显示,用吗啡或舒芬太尼分别处理后,两组细胞的增值抑制率都显著高于对照组,表明A549细胞的增殖受到显著抑制,并且两种药物均表现出剂量依赖性抑制作用(p<0.05);与吗啡相比,舒芬太尼的抑制作用更加明显(p<0.05)。3、吗啡和舒芬太尼对A549细胞单细胞克隆形成能力的影响:使用平板克隆形成实验检测不同浓度吗啡(10、20、40μg/mL)和舒芬太尼(0.01、0.02、0.04μg/mL)预处理A549细胞48小时后单细胞克隆形成能力的影响,发现A549细胞形成克隆的能力明显减弱(p<0.05),与相应浓度的吗啡组相比,舒芬太尼处理后的细胞形成的克隆数目更少(p<0.05)。4、吗啡和舒芬太尼对A549细胞凋亡情况的影响:使用Annexin V-FITC/PI双染法检测不同浓度吗啡(10、20、40μg/mL)和舒芬太尼(0.01、0.02、0.04μg/mL)预处理A549细胞48小时后对细胞凋亡的影响,结果显示,与对照组相比,各浓度的吗啡或舒芬太尼处理A549细胞后都能够明显促进凋亡(p<0.05),但是与吗啡组相比,舒芬太尼组凋亡率无明显差异。5、吗啡和舒芬太尼对A549细胞凋亡相关蛋白表达的影响:使用不同浓度吗啡(10、20、40μg/mL)和舒芬太尼(0.01、0.02、0.04μg/mL)预处理A549细胞48小时后,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测A549细胞凋亡相关蛋白表达的变化,结果显示,药物实验组中的P53和Bax表达量都要明显高于对照组,而Bcl-2的表达量相对降低(p<0.05)。吗啡与对应浓度的舒芬太尼处理后蛋白表达无明显差异。结论:1、吗啡和舒芬太尼都能够在体外使人肺腺癌A549细胞的增殖受到抑制并且诱导A549细胞凋亡;2、相比较于吗啡,舒芬太尼在体外对人肺腺癌A549细胞增殖的抑制作用更加明显;3、吗啡和舒芬太尼抑制人肺腺癌A549细胞的增殖以及诱导凋亡可能与调控凋亡相关蛋白P53,Bcl-2,Bax的表达有关。