【摘 要】
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植酸酶(phytase, myo-inositol hexakisphosphate phosphohydrolases)是一种能水解植酸的磷酸酶类.在饲料中添加植酸酶对提高畜禽业生产效益及降低植酸磷对环境的污染有重要
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植酸酶(phytase, myo-inositol hexakisphosphate phosphohydrolases)是一种能水解植酸的磷酸酶类.在饲料中添加植酸酶对提高畜禽业生产效益及降低植酸磷对环境的污染有重要意义.该研究通过改变基因偏爱密码,人工合成Aspergillus fumigatus植酸酶基因,以巴斯德毕赤(Pichia pastoris)酵母作为生物反应器,高效表达植酸酶基因.为了提高A.fumigatus植酸酶的比活,将其氨基酸序更第27位的Gln(CAA)突变为Leu(CUU),获得工程菌X33/pGAPZaA-rafp(m)14,酶活为24460±12(U/mL),是突变前的2.6倍;表达量可达149.8mg/L,占上清总蛋白的78.2﹪.但耐热性较突变前有所降低,90℃ 20min温育后,酶活为处理前的62.1﹪.空变导致在pH6.5左右活性明显增加,而在偏酸性的范围内,对酶少的影响不大.同时该文构建了pGAPZaA-rafp、pGAPZaA-rafp(m)的多拷贝重组表达载体.筛选到含3拷贝植酸酶基因的酵母工程菌X33/pGAPZaA-rafp (3c)-11,酶活为18740±8(U/mL),表达量较单拷贝植酸酶有显著提高,达到219.8mg/L,占上清总蛋白82.5﹪.表达产物经90℃加热20min后,保留83.1﹪酶活.但构建的突变植酸酶多拷贝基因表达产物酶活总体要比单拷贝基因低.
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