枸杞多糖抑制辐射损伤小鼠小肠上皮细胞凋亡及其机制研究

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目的电离辐射是一把双刃剑,它既可用于医学诊断和治疗疾病,同时也可以对机体造成损伤。随着恶性肿瘤发病率的不断增加,放射治疗的运用也愈发广泛。放射性肠炎(radiation enteritis,RE)是指临床上位于腹腔、盆腔和腹膜后的恶性肿瘤经过放射治疗引起正常肠组织损伤的疾病,目前临床上常用的辐射防护剂在使用中受到了种种条件限制,所以发现一种安全、价廉和有效的RE治疗方法势在必行。本研究利用中草药枸杞中的主要活性成分枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharide,LBP)对辐射损伤小鼠小肠上皮细胞(Intestinal epithelial cells,IECs)进行干预,明确LBP对辐射损伤小鼠小肠上皮的防护作用,并探究LBP抑制IECs凋亡的作用及其可能存在的相关机制。方法使用直线加速器以6MV X线一次性均匀照射小鼠腹部(上界为剑突以下,下界为耻骨联合以上,其余部位用铅砖屏蔽)建立小鼠放射性肠损伤模型,把它们随机分为正常组、辐射组、低剂量LBP组(辐射+200 mg/kg LBP),中剂量LBP组(辐射+400 mg/kg LBP)、高剂量LBP组(辐射+800 mg/kg LBP)及未辐射LBP组(800 mg/kg LBP),通过不同浓度的LBP连续灌胃,每天1次,每次0.5ml,辐射组给予同等剂量的生理盐水,7d后制作出小鼠小肠病理切片在光镜下进行观察,为探究LBP对辐射损伤小鼠IECs凋亡的影响,应用流式细胞术(Flow cytometer,FCM)测量小鼠IECs凋亡状况,选用CCK-8法检测小鼠IECs活力,为研究LBP对辐射损伤小鼠IECs抗氧化能力,使用酶标仪检测小鼠IECs超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)的活性及丙二醛(Malondialdehyde,MDA)的含量,最后采取蛋白免疫印迹法(Western blotting,WB)比较不同组别之间IECs中B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)及和Bcl-2同一家族的水溶性相关蛋白(Bax)的表达情况,探索LBP抑制放射性肠损伤小鼠IECs凋亡的可能作用机制。结果小鼠经过辐照后,小肠绒毛明显缩短,大量炎症细胞浸润,上皮连续性遭到破坏,并出现小溃疡,而经过LBP干预的各组小肠上皮都得到了不同程度的恢复,低剂量LBP组有不完整的上皮,小肠绒毛的长度较短,且密度较低。中剂量LBP组,小肠绒毛长度较短但排列却比较整齐,能够发现较为连续的上皮,当LBP浓度达到高剂量时,肠道组织近乎恢复正常水平,随着LBP剂量的不断增加,小肠组织形态也更加接近于正常组。经过LBP处理的各组[(7.39±0.58)%,(6.71±0.21)%,(5.85±0.07)%]与辐射组[(9.44±0.51)%]相比较,小鼠IECs细胞凋亡率显著降低(P<0.05),未辐射LBP组较正常组凋亡率也较低[(4.88±0.33)%vs(5.67±0.38)%,P<0.05]。当LBP浓度达到400mg/Kg和800mg/Kg时,与辐射组(1.033±0.577)相比,中剂量LBP组(1.189±0.115)、高剂量LBP组(1.213±0.063)细胞活力均较高(P<0.05),但中剂量LBP组与高剂量LBP组之间细胞活力并没有显著的差异。受到辐射后7 d,检测IECs细胞中抗氧化酶SOD活性。发现与辐射组[(1.13±0.08)U/ml]相比,低剂量LBP组SOD活性增加没有显著差异,中剂量LBP组[(1.32±0.06)U/ml]、高剂量LBP组[(1.53±0.03)U/ml]SOD活性均较高,并且随着LBP剂量的增加,SOD活性增强效果越明显,与正常组[(1.53±0.04)U/ml]相比,未辐射LBP组[(1.64±0.06)U/ml]SOD活性也较高(P<0.05)。随着LBP浓度的增加(200mg/kg,400mg/kg及800mg/kg),低剂量LBP组[(9.55±0.32)nmol/mgport]、中剂量LBP组[(7.65±0.61)nmol/mgport],高剂量LBP组[(5.41±0.31)nmol/mgport]MDA含量也呈现出逐渐降低的态势(P<0.05)。使用Western blot法检测凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax表达情况,结果发现,与辐射组Bcl-2表达量(0.79±0.10)相比,低剂量(1.14±0.11)、中剂量(1.18±0.20)、高剂量LBP组(1.42±0.14)Bcl-2表达量明显增加(P<0.05,P<0.05,P<0.001),低剂量(1.08±0.10)、中剂量(0.96±0.17)、高剂量LBP组(0.85±0.14)Bax表达量与辐射组(1.33±0.11)相比明显降低(P<0.05,P<0.01,P<0.001),与正常组(0.76±0.07)相比,未辐射LBP组(0.52±0.11)Bax表达量降低(P<0.05)。结论LBP能够保护小鼠小肠上皮,抑制小鼠辐射损伤所致IECs损伤,其机制包括提高SOD活性、降低MDA的产生来减弱氧化应激反应,同时作用于线粒体途径,使Bcl-2蛋白表达上调,Bax蛋白表达下调抑制IECs凋亡。
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