小麦蛋白磷酸酶2A基因TaPP2AbB”-α启动子的克隆及表达分析

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小麦(Triticum aestivum L.)是世界上重要的粮食作物之一,其安全生产具有举足轻重的作用。在自然条件下,小麦的生长发育受到多种非生物逆境的影响,因此小麦抗逆性机理和抗逆育种是当今研究的重要课题。植物蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)是由结构亚基A、调节亚基B和催化亚基C组成的异源三聚体蛋白,其主要功能是使蛋白质去磷酸化。PP2A在植物体内参与多种逆境胁迫信号转导途径,在应答逆境胁迫中发挥着重要功能。为了了解小麦蛋白磷酸酶2A基因TaPP2AbB"-α启动子的表达特性,本研究以小麦品种"旱选10号"为实验材料,克隆得到TaPP2AbB"-α基因启动子PB"α。通过生物信息学分析、GUS组织化学染色和GUS荧光定量分析等方法明确了启动子PB"α的表达特性。主要研究结果如下:1.以小麦"旱选10号"基因组DNA为模板,PCR扩增得到长度为1899 bp的TaPP2AbB"-α启动子片段PB"α。2.生物信息学分析结果显示,全长启动子PB"α包含多种顺式作用元件,其中基本的调控元件有TATA-box、CAAT-box,此外还包含多种逆境响应元件,如脱水响应元件MYCCONSE,逆境及乙烯响应元件GCCCORE,干旱诱导的MYB结合元件 EECCRCAH1 等。3.构建启动子全长及缺失片段表达载体,即PB"α、PB"α-1545、PB"α-1389、PB"α-945、PB"α-483和PB"α-150,并采用农杆菌介导法转化拟南芥,获得阳性植株。4.转基因拟南芥GUS组织化学染色显示,启动子PB"α和5’端缺失片段PB"α-1545、PB"α-1389可以驱动GUS基因表达,具有启动子活性,推测PB"α的-1389~-946 bp区段是启动子的活性区域。5.对含有不同启动子片段的拟南芥株系分别进行NaCl和甘露醇处理,与对照(CK)相比,转PB"α和5’端缺失片段PB"α-1545、PB"α-1389的拟南芥幼苗GUS活性显著升高,而其他5’端缺失片段转基因拟南芥幼苗GUS活性没有显著变化,表明PB"α启动子-1389~-946 bp是应答NaCl、甘露醇胁迫的活性区域。本研究明确了TaPP2AbB"-α启动子响应盐和渗透胁迫的活性区域,为进一步合理选用启动子进行作物抗逆性的遗传改良提供了依据和技术支持。
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