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目的:宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤,其发病率占女性生殖系统恶性肿瘤的首位。晚期患者手术难以根治,放疗、化疗效果不理想,因此,提高化疗药物的敏感性,诱导肿瘤细胞凋亡成为改善晚期宫颈癌患者生活质量的有效措施。Survivin基因是近年来发现的一种细胞凋亡抑制基因,它位于17q25,是IAP基因家族(inhibitor of apoptosis proteins)中的一员,它在人和鼠的胚胎和胎儿期及肿瘤组织中高度表达,而在正常分化成熟组织中几乎不表达。研究证实Survivin基因的高表达与宫颈癌细胞的高耐药性密切相关。因此,抑制Survivin基因表达有可能提高宫颈癌细胞对化疗药物的敏感性,该基因有望成为宫颈癌基因治疗的靶点。RNA干扰作为近年来发现的一种高效的,广泛存在的,具有序列特异性的转录后水平的基因沉默过程。本研究利用RNAi技术抑制宫颈癌Hela细胞株Survivin基因,观察Hela细胞株的细胞凋亡、Survivin蛋白表达,及对顺铂药物敏感性的变化,为宫颈癌的基因治疗提供实验依据。 方法:以培养的宫颈癌Hela细胞株为体外研究模型,设三组进行实验:正常组,对照组,RNAi组。正常组为脂质体组;对照组为pSileneer neo siRNA Expression Vector kit中附带的阴性对照,载体内插入的片段为与人、鼠、兔的已知序列完全不相关的序列;RNAi组:利用文献提供的目标序列构建抑制survivin表达的RNAi载体(pSSURV),并转染Hela细胞。(1)半定量RT-PCR检测Survivin mRNA,Western blot法检测survivin蛋白在正常组、对照组、RNAi组中的表达情况。(2)MTT法进行DDP对各组细胞存活率作用浓度分析:转染细胞24小时后,分别以如下浓度:10、5、1、0.25、0.05、0.01、0mg/L的DDP(山东齐鲁