论文部分内容阅读
目的：探讨NEDD9在人肝癌组织中的表达情况,分析其与肝癌临床病理特征的相关关系,明确肝癌中NEDD9异常表达的临床意义。在5株肝癌细胞株中,采用WB及qRT-PCR检测NEDD9的表达情况,选取Hep-G2、MHCC-97-H,采用NEDD9特异性siRNA,研究NEDD9基因沉默后对肝癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法：收集广西医科大学附属肿瘤医院肝胆外科2010年至2012年外科手术切除并经过病理证实的肝细胞癌组织及临近的非癌组织标本112例。提取肝癌及邻近非癌组织总RNA,采用qRT-PCR检测NEDD9在肝癌组织及邻近非癌组织中mRNA的表达,采用Westernblot检测各肝癌细胞株中NEDD9蛋白表达情况,比较肝癌组织与邻近非癌组织、肝癌细胞株与永生化肝细胞株中NEDD9的表达。并利用免疫组化学方法检测112例肝癌及邻近非癌组织标本中NEDD9蛋白的表达,将其分为低表达组(0-5分)及高表达组(6-12分),分析NEDD9高低表达组与肝癌临床病理因素及预后的关系。选取Hep-G2、MHCC-97-H2株肝癌细胞株,米用RNA干扰技术默NEDD9,研究NEDD9基因沉默后对肝癌细胞生长、凋亡、迁移和侵袭的影响。结果：(1)NEDD9在不同肝癌细胞系中表达量不同,除SK-hep-1细胞系外,在Hep-G2、MHCC-97-H、SSMC-7721、Huh7细胞系中,表达量均高于HL7702(p<0.05)。在随机选取的4对样本组织中,NEDD9在肝癌组织明显高于非癌组织(p<0.05)。qRT-PCR结果显示：在肝癌组织中,NEDD9 mRNA表达量明显高于非癌组织(P=0.002<0.05),且在肝癌组织中42.9%(48/112)NEDD9 mRNA表达量上调2倍以上。(2) NEDD9的表达与甲胎蛋白(AFP,P=0.029)、BCL C分期(P=0.036)、肿瘤大小(p=0.041)和组织学分级(p=0.002)相关,相关系数分别为0.228、0.288、0.232、0.311(P<0.05),与年龄、性别、乙型肝炎、Child-Pugh分级,肿瘤数目,肿瘤包膜和癌栓无关。同时NEDD9的表达量与DFS和OS相关,进一步采用COX分析,NEDD9高表达组(6-12分)与低表达组(0-5分)相比,DFS(P=0.04<0.05)及OS(P<0.001)均缩短。COX单变量分析结果表明,癌栓、肿瘤大小、BCLC分期、血清AFP、组织学分级和NEDD9的表达量与肝癌预后密切相关。COX多因素分析表明,肿瘤大小(P=0.012),BCLC分期(P=0.040)和NEDD9(P<0.001)的表达量是肝癌预后的独立因素。(3)NEDD9-siRNA沉默后,肝癌细胞株MHCC97-H、HepG2 NEDD9的mRNA及蛋白表达量下调,最高下调为1/20。沉默后MHCC97-H、HepG2的增殖、迁移及侵袭均受到抑制,诱导肝癌细胞凋亡。其中对增殖的抑制在72h最大,其抑制率为63士2%(P<0.01)。细胞迁移(332VS207,P<0.01)及侵袭(205VS121,P<0.01)个数明显减少。转染48h后,促进肝癌细胞系凋亡(34%vs2%,P<0.01)。结论：在肝癌患者中,NEDD9普遍高表达,其高表达与肝癌BCLC分期、组织分化程度、肿瘤大小相关,高表达组预后较低表达组差。在选取的肝癌细胞系中,NEDD9沉默后,肝癌细胞株增殖、迁移和侵袭能力下降,并诱导肝癌细胞凋亡。NEDD9可能成为治疗肝癌的新靶点及判断预后的指标。