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【目的】本研究通过培养大鼠原代肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）并进行不同时间低氧处理,观察低氧对大鼠原代PASMCs增殖、细胞内[Ca2+]i的影响,以及在不同低氧时间处理下,低氧诱导促有丝分裂因子（HIMF）的表达情况,探讨HIMF对大鼠原代PASMCs增殖的作用及机制。【方法】（1）大鼠原代肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）的提取、培养及鉴定:利用相关显微器械（显微剪和显微镊）在体式显微镜下仔细分离出大鼠远端肺动脉,运用酶消化方法消化、分离出原代PASMCs并进行培养;在光镜下观察细胞形态,通过平滑肌细胞α肌动蛋白（α-SMA）、波形蛋白（Vimentin）以及八因子（FactorⅧ）特征性免疫荧光标记染色来鉴定细胞的纯度。（2）观察慢性低氧对大鼠原代PASMCs增殖的影响:选取生长状态良好的第2-3代细胞,将其分为不同低氧时间处理组（H24h、H48h、H60h、H72h）,置于37℃,4%O2、5%CO2、91%N2的三气培养箱中,低氧下暴露不同时间（24h,48h,60h,72h）,并设置常氧对照组,分别采用CCK-8、细胞计数以及Edu法观察不同时间低氧对大鼠原代PASMCs增殖的影响。（3）检测不同时间低氧对大鼠原代PASMCs中HIMF表达的影响:采用实时荧光定量聚合酶链式反应（real-time quantitative PCR,Q-PCR）、蛋白免疫印迹（western-blot）方法观察不同时间低氧对大鼠原代PASMCs中HIMF mRNA和蛋白质表达的影响。（4）大鼠原代PASMCs内[Ca2+]i浓度测定:将原代提取的大鼠PASMCs接种到六孔板盖玻片上,置于37℃,4%O2、5%CO2、91%N2的三气培养箱中,予以上述细胞增殖最强的时间点进行低氧处理,并设置常氧对照组,随后采用细胞动态荧光成像系统检测其对大鼠原代PASMCs内[Ca2+]i浓度的影响。（5）特异性siRNA沉默大鼠原代PASMCs中HIMF的表达,再予以常氧和上述最佳低氧时间处理,观察其对大鼠原代PASMCs内[Ca2+]i浓度的影响。（6）构建HIMF过表达慢病毒载体,以HIMF慢病毒转染大鼠原代PASMCs,再予以常氧和最佳低氧时间处理,观察其对大鼠原代PASMCs内[Ca2+]i浓度的影响。【结果】1、利用酶消化方法成功分离出大鼠原代PASMCs,光镜下观察细胞形态呈长梭形,免疫荧光鉴定提示:α-SMA荧光染色呈阳性反应,而Vimentin以及FactorⅧ染色结果均为阴性,细胞纯度达98%以上。2、常氧对照组和慢性低氧（4%O2、5%CO2、91%N2）组大鼠原代PASMCs增殖活力都随着培养时间的延长而增加,低氧60h时大鼠原代PASMCs增殖活力达到高峰与常氧对照组相比较具有显著性差异。3、各常氧对照组大鼠原代PASMCs中HIMF mRNA和蛋白质均呈低水平表达,低氧能够诱导大鼠PASMCs中HIMF mRNA和蛋白质表达增加,并呈时间依赖性,H48h、H60h、H72h组相对于各常氧组HIMF mRNA和蛋白质的表达明显增加。4、慢性低氧（60h,4%O2）条件下,大鼠原代PASMCs中储量操纵性钙内流（SOCE）水平较常氧对照组（N60h）比较显著升高。5、特异性siRNA沉默大鼠原代PASMCs中HIMF基因的表达后,再予以慢性低氧（4%O2、5%CO2、91%N2）处理60h,相对于慢性低氧组（H60h）,PASMCs内SOCE水平明显降低;沉默HIMF基因后予以常氧处理60h,相对于正常对照组（N60h）PASMCs内SOCE水平无明显改变。6、慢病毒过表达大鼠原代PASMCs中HIMF基因后,再予以常氧处理60h,相对于常氧对照组（N60h）PASMCs内SOCE水平明显升高;过表达HIMF基因后予以慢性低氧（4%O2、5%CO2、91%N2）处理60h,相对于慢性低氧对照组（H60h）PASMCs内SOCE水平无明显改变。【结论】1、低氧能够上调大鼠原代PASMCs中HIMF的表达、促进PASMCs的增殖;2、低氧能够增加大鼠原代PASMCs中储量操纵性钙内流（SOCE）水平;3、HIMF在低氧诱导的大鼠原代PASMCs SOCE水平增加的过程中可能具有重要作用。