抗香蕉枯萎病菌链霉菌菌剂制备及其防效测定

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香蕉枯萎病传染迅速且极难防治,目前在我国海南、广东、福建等香蕉适植区大范围发生,对我国乃至全世界的香蕉生产造成了巨大的挑战。本论文从海南原始热带雨林—霸王岭,分离得到对香蕉枯萎病菌具生防潜力的两株放线菌BWL58及BWL15-4菌株,并对此两菌进行了初步分类鉴定;分别对两株菌进行固态发酵条件优化并对菌株的拮抗机理进行了初步探讨;对此两菌制作成微生物菌剂进行了初步实验,最后对该菌剂对香蕉枯萎病的大田防效进行了初步研究,主要研究结果如下:1.从两株放线菌的形态特征、培养特征、部分生理生化特征以及16S rDNA基因序列等方面进行测定,初步将BWL58菌株鉴定为Streptomyces ahygroscopicus(不吸水链霉菌),BWL15-4菌株鉴定为Streptomyces albospinus(白刺链霉菌)。2.通过单因子试验,从多种粗细粮中筛选出大米做为主要培养基基质;通过正交试验优化了培养基配方,并在此基础上对发酵条件进行了初步探讨:BWL58优化后的培养基配方为:无机盐水占大米重量的150%,黄豆粉占大米重量的5%,麸皮占大米重量的20%,沙土占大米重量的30%。固态发酵条件为:pH7.0左右,接种量2%,发酵温度28℃。BWL15-4优化后的培养基配方为:无机盐水占大米重量的130%,黄豆粉占大米重量的10%,麸皮占大米重量的20%,沙土占大米重量的20%。固体发酵条件为:初始pH6.3左右,接种量3%,发酵温度29.5℃。3.对两株链霉菌的拮抗活性及其拮抗机理进行了初步探讨,在与FOC对峙平板上,我们发现两株链霉菌对FOC能产生明显的抑菌圈,并使FOC菌丝边缘变成红褐色。通过显微镜观察我们发现FOC细胞裂解释放内含物后菌丝扭曲在一起。固态发酵物渗出液经微孔过滤除菌后以FOC为指示菌,使用牛津杯测活,结果发现其活性不如液体发酵液强;而其黄豆粉发酵液将FOC菌丝浸泡10小时后,再回接到PDA平板上FOC不再生长。另外将两菌株的细胞破碎释放内含物后,过滤,同样使用牛津杯测活法,发现对FOC没有活性。上述现象表明两株链霉菌的拮抗物质主要是在其次生代谢产物中。4.对两株链霉菌的固体发酵产物进行了吸附载体的筛选,第一批筛选得到非耕作层土与混合菌以2:1的比例混合时,在常温下保存3个月后,孢子数保持较高数量,仍然达到109fu/g。第二批筛选,本研究首次采用甘蔗渣粉末和甘蔗叶片粉末做为生防菌吸附载体,研究发现选用甘蔗渣粉末或者甘蔗叶片粉末做吸附载体,混合菌保存6个月以上孢子量仍达到108cfu/g以上。5.通过两菌株菌剂防治香蕉枯萎病的小区试验表明,在严重发病地块,防效不理想,仅达到20%左右,试验结果表明,施用菌剂量并非越多越好,以施肥总质量的1%左右浓度的菌剂足够。6.香蕉枯萎病大田防治对比试验结果表明,种植本实验室选育的抗香蕉枯萎病新品种和结合施用两菌株混合菌肥作基肥,根据我们的实验结果,在本试验条件下,可将香蕉枯萎病发病率控制在10%以下。
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