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胃癌是目前最常见消化道肿瘤之一，化疗是治疗胃癌的三大主要手段之一，临床应用中往往出现多药耐药现象（MDR），其详细分子机制仍然值得探索。近年研究表明HMGB1诱导自噬并参与了结直肠癌、骨髓瘤、白血病等的耐药。但HMGB1在胃癌细胞耐药的作用机制仍不清楚。本研究试图沉默HMGB1基因，探讨自噬的改变对胃癌细胞耐药的影响。第一部分构建pNL-ShHMGB1慢病毒载体：首先设计并合成针对HMGB1mRNA四个靶位点下调的ssRNA，退火生成dsRNA连接在pSilencer1.0载体上。酶切ShRNA表达框并将目的片段克隆到pNL慢病毒载体上并经过PCR筛选，酶切和测序鉴定，确保该片段正确克隆到慢病毒载体pNL上。第二部分筛选能够诱导小鼠前胃癌细胞（mouse forestomach carcinoma cells, MFC）发生自噬的化疗药物：采用MTT方法检测吉非替尼(gefitinib Gef)、阿霉素（doxorubicin DOX)、格尔德霉素(geldanamycin GA)、丝裂霉素（mitomycin MMC）对MFC细胞增殖抑制影响并计算药物的半数抑制浓度（IC50）；其半数抑制浓度作用于MFC细胞检测其LC3-Ⅱ表达量，筛选出诱导MFC细胞发生自噬的药物。结果提示，DOX、Gef、GA可诱导MFC细胞发生自噬且具有时间和剂量的依赖性。第三部分沉默HMGB1蛋白对化疗药物诱导MFC细胞自噬的影响：pNL-ShHMGB1质粒瞬时转染至MFC细胞，检测HMGB1mRNA和蛋白表达量， Q-PCR结果提示四个靶位点均能够下调HMGB1mRNA的表达，尤其是针对HMGB1BOX的第三个靶位点下调效果最为明显（P＜0.01）；Western Blot结果提示pNL-ShHMGB1-3/4可成功下调HMGB1蛋白。将筛选出的pNL-ShHMGB1-3/4质粒和pHelper及pVSVG共转染293FT细胞，包装慢病毒，慢病毒滴度为2×107TU/ml。由于本实验慢病毒感染MFC效率低，故采用pSilencer-ShHMGB1瞬转MFC细胞，探讨HMGB1基因沉默对DOX诱导MFC细胞发生自噬的影响。结果提示，瞬时转染pSilencer-ShHMGB136h可成功下调HMGB1蛋白表达，HMGB1基因沉默可显著抑制DOX诱导的MFC细胞发生自噬（P＜0.01）。结论：HMGB1基因沉默可抑制DOX诱导的MFC细胞自噬。这为改善治疗胃癌产生耐药现象提供了新的思路。