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胆管癌(cholangiocarcinoma)是起源于胆管系统上皮细胞的恶性肿瘤，是继肝癌之后的第2大肝胆系统肿瘤，胆管癌发生常见于中老年人，男性略多于女性。胆管癌早期缺乏特异性的临床表现，肝外胆管癌在中晚期才会出现典型黄疸症状，肝内和肝外胆管癌的早期就诊率很低，所以治疗效果也不尽人意，严重影响了人类的健康与寿命。与大多数肿瘤一样，胆管癌的发生是一个多步骤进程，建立在机体本身遗传因素与环境因素相互作用的基础之上。在胆管癌的发生发展过程中，由于胆管上皮细胞的慢性损伤，通过自身增殖信号激活、抗生长信号丢失，逃脱凋亡，无限复制、血管异常增生等多个步骤，最终导致胆管癌的发生与浸润、转移。Raf激酶抑制蛋白(Raf kinase inhibitor protein, RKIP)是磷脂酰乙醇胺结合蛋白家族(phosphatidylethanolalmine-binding proteins, PEBPs)的成员之一，广泛存在于不同种属。它参与多种信号转导通路的调节，被认为能抑制Raf-MEK1/2-ERK1/2和NF-κB信号转导途径，还通过抑制G蛋白偶联受体激酶-2(GPCR-2)来发挥受体信号调节器的作用。最近多项研究发现，RKIP与肿瘤关系密切，参与肿瘤的发生及发展。RKIP在大多数肿瘤中低表达，调控肿瘤细胞的生长、凋亡、浸润及转移等多种生物学行为，但RKIP对各种肿瘤细胞生物学行为的影响及其机制需进一步研究。我们将就RKIP对胆管癌细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响及机制进行研究。目的：我们利用过表达的RKIP，靶向RKIP的RNA干扰重组腺病毒的构建，探讨RKIP过表达及低表达对胆管癌细胞株RBE的增殖、凋亡、侵袭及迁移能力的影响，探讨RKIP对RBE细胞生物学行为影响的机制，是否通过Raf/MEK/ERK信号转导通路介导产生。方法：细胞增殖行MTT及BrdU掺入法分析；通过流式细胞术、透射电镜技术及TUNEL技术检测细胞凋亡；通过体外细胞侵袭实验检测RBE细胞的侵袭能力；通过伤口愈合实验检测细胞的迁移能力。通过Western blot方法分析RKIP、p-RKIP、Raf、p-Raf、ERK、p-ERK、GRK2及GAPDH蛋白的表达。结果：(1) MTT结果显示，与control组比较，RKIP-RNAi-AD、NC-RNAi-GFP-AD、RKIP-AD及GFP-AD各组的细胞活力在不同时间点无差异。(2) BrdU检测结果显示，与control组相比，各组细胞增殖率无差异。(3)Annexin-V/PE联合标记流式细胞术检测结果显示，重组腺病毒转染RBE细胞48h后，与Control组(0.00%±0.00%)相比，各组凋亡率均无差异。(4) TUNEL检测结果显示，在腺病毒感染RBE48h后，各组凋亡细胞极少且各组之间无差异。(5)透射电镜结果显示，RKIP-AD组与Control组均未见凋亡细胞。(6)细胞侵袭实验显示，与control组相比，GFP-AD组、NC-RNAi-GFP-AD组RBE细胞侵袭力均无差异(60.67±22.02,52.67±16.62vs54.33±16.21)，RKIP-RNAi-AD与NC-RNAi-GFP-AD组相比，侵袭力明显增加(115.00±18.30vs52.67±16.62)，P<0.05; RKIP-AD与GFP-AD组相比，侵袭力明显下降(17.00±6.48vs60.67±22.02), P<0.05。(7)伤口愈合实验结果显示，12小时之后感染RKIP-RNAi-AD的RBE细胞已经重新融合86%，而NC-RNAi-GFP-AD组融合率只有71.6%，两组有统计学意义，P<0.05。RKIP-AD组RBE细胞的伤口愈合率明显降低，只有53.13%，而GFP-AD组愈合率为74.13%，两组之间有统计学意义，P<0.05。(8) Western blot检测RKIP蛋白的表达情况，结果显示，与GFP-AD组相比，RKIP-AD组大量表达RKIP异位蛋白(2.77±0.95vs0.85±0.44)，与NC-RNAi-GFP-AD组相比，RKIP-RNAi-AD组RKIP表达下降(0.26±0.17vs0.88±0.37)，与control组相比，GFP-AD组及NC-RNAi-GFP-AD组均无差异。(9) Western blot检测Raf及ERK的磷酸化水平显示各组均未见差异。(10) Western blot检测GRK2蛋白的表达情况，结果显示，与GFP-AD组相比，RKIP-AD组GRK2的表达降低(0.41±0.44vs1.35±0.62)，与NC-RNAi-GFP-AD组相比，RKIP-RNAi-AD组GRK2表达升高(1.43±0.53vs0.67±0.42)，与control组相比， GFP-AD组及NC-RNAi-GFP-AD组均无差异。结论：RKIP对胆管癌细胞的增殖及凋亡无影响；RKIP抑制了胆管癌细胞的侵袭及迁移能力；在RBE细胞中RKIP对MAPK信号转导通路无影响，但参与了G蛋白偶联受体通路的调节。