一.研究背景根据WHO数据统计,全球乙肝病毒(Hepatitis B Virus, HBV)感染人数高达20亿。我国更是乙型肝炎的高发区,加强对乙型肝炎(以下简称乙肝)的检出能力并及早给予治疗,是保障我国人民健康的重要措施。与其它包膜病毒相比,HBV具有较强的抵抗外环境灭活的能力。在HBV感染患者的整个病程中,乙肝病毒表面抗原(又称：乙肝表面抗原/Hepatitis B Surface Antigen/HBsAg)是最早出现的血清学标志物,通常在临床症状出现前出现,在肝脏损害和黄疸等生化指标改变前的2到8周便可检测到,并在能痊愈的患者中数月后被机体自动清除,因此被常规作为诊断急慢性HBV感染,血液或器官捐献者的筛查指标,也常用于人群乙肝感染和传播的监测。但是HBV变异发生率较高容易导致漏检,尤其发生在接种乙肝疫苗免疫预防的儿童、肝移植受者和慢性携带者中。a决定簇为HBV颗粒表面突起的双环状结构,在S蛋白亲水基团的124至147位置,是主要的商品化HBsAg检测试剂中乙肝表面抗体(又称：Hepatitis B Surface Antibody/Anti-HBs)的结合位点,所有的HBV基因型都有a决定簇。上述疫苗或药物诱导的变异会引起HBV表面的a决定簇的氨基酸序列替代或变化,导致假阴性结果。为了减少HBV变异导致的乙肝患者漏检事件,降低输血传播乙肝的潜在风险,通过改善检测技术和试剂来提高检测的灵敏度和特异度尤为重要。为提高实验室检测质量,目前国内检验技术从早期的酶联免疫吸附法(英文简称：ELISA)更新为了国际主流使用的化学发光法(英文简称ELCA/ECL),德国罗氏诊断公司更推出的第二代改良型化学发光IIBsAg检测试剂盒。但化学发光检测系统和试剂价格较为昂贵,为了合理高效地利用医疗资源,临床实验室应当客观地了解和评估这些临床检测系统和试剂提高检测乙肝的准确度和灵敏度的程度,在适合的范围内使用。本文就该试剂和现在实验室广泛使用的科华酶联免疫(英文简称：ELISA)试剂以及目前全球公认的金标准----雅培试剂进行多中心评估。二.研究目的评估第二代化学发光HBsAg检测试剂的性能,并了解其临床应用价值。三.研究内容1.通过中国8家医院的多中心评估,评价在检出HBV突变能力方面做了改进的第二代化学发光试剂的临床检测性能。2.了解第二代化学发光HBsAg检测试剂的临床应用价值,同时进行小范围的流行病学调查。四.研究方法1.收集8家医院212例临床确诊乙肝阳性标本,评估罗氏第二代化学发光试剂,雅培化学发光试剂,科华酶联免疫试剂检测的准确度；6家医院检测13种重组突变株和3种自然突变株,评价试剂检出HBV变异的能力；8家医院检测8组血清转换盘评估试剂的灵敏度；6家医院收集1916例临床标本计算第二代化学发光试剂的灵敏度,特异度和ROC曲线。分析3种试剂对于中国人群标本检测的差异：·哪一种试剂检出HBV基因突变能力强,准确度高；·哪一种试剂能最准确,灵敏地反应出患者的血清学转换情况；·哪一种试剂更早地筛查出患者的HBsAg阳性结果,帮助缩短窗口期。2.另一方面,使用罗氏第二代HBsAg化学发光检测试剂检测上海市某中心城区三甲医院950例体检人群,探讨第二代化学发光试剂实际临床应用。五.研究结果首先,临床确诊的阳性标本验证临床符合率,罗氏化学发光试剂与科华酶联免疫试剂临床阳性符合率为100%；罗氏和雅培化学发光试剂符合率为99.25%(雅培一例为阴性)。且罗氏和科华、雅培的相关趋势总体而言基本保持一致,即罗氏的值越高,相应的科华或者雅培也处于高值,反之亦然,且低值区更符合相关趋势。其次,在HBV突变株检测实验中,3种试剂差异较为明显。13株重组乙肝病毒血清突变株和3株天然变异株比对结果,罗氏的第二代HBsAg检测试剂变异株总检出率为98.1%,雅培的化学发光试剂盒能检出约87.6%的突变株,科华的ELISA试剂盒仅能检出约19.3%的突变株。再次,血清转换盘评估试剂敏感度的实验中,罗氏第二代HBsAg检测试剂和科华ELISA试剂共同参与了5组血清转换盘检测。大多数情况下,罗氏ECL第二代试剂检测结果已经表现出阳性,而科华ELISA试剂时间比较滞后：科华试剂总延迟天数为230天,中位值为39天；罗氏试剂总延迟天数为162天,比科华提早了78天；中位值为19天,比科华提早20天,两者比较结果有统计学显著差异(wilcoxon配对检验,P=0.043<0.05)。罗氏和雅培两个化学发光试剂的8组血清转换盘比较,罗氏总延迟天数179天,中位值15. 5天,雅培总延迟天数164天,提早了15天,中位值为16天,两者结果无统计学显著性差异(wilcoxon配对检验,P=0.553>0.05)。试剂的临床灵敏度用敏度指数(假阴性样本数/检测总样本数,越接近于“0”说明临床灵敏度越高)表示,罗氏为0.49,雅培为0.55,科华为0.90。最后,利用6家医院1916例门诊常规患者标本结果计算罗氏ECL第二代化学发光试剂的特异度和敏感度,结果为灵敏度99.7%,假阴性率0.3%,特异度99.0%,假阳性率1.0%,约登指数0.987,阳性预期值98.5%,阴性预期值99.8%, ROC曲线下面积为0.994,标准误0.002,95%可信区间为0.990到0.998。另外,罗氏ECL第二代化学发光HBsAg检测试剂临床应用实验共选取上海某中心城区医院随机采样的950例体检标本,男女之比约1.081：1,年龄均值为48.06±12.85岁,年龄范围在19岁～88岁之间。总阳性率为8.32%,男性阳性率为9.02%,女性7.21%,男性略高于女性,性别之间差异无统计学意义(X2=0.973,自由度=948,P=0.324>0.05)；HBsAg阳性者年龄主要分布在45±11岁,不同年龄阳性率无统计学显著差异(X2=5.556,P值为0.592>0.05)。上述一系列实验表明,罗氏ECL第二代化学发光检测试剂在检测突变的能力和敏感度方面明显优于国产的ELISA试剂,略优于第一代雅培化学发光试剂,能更早更灵敏准确地检出阳性结果,缩短窗口期。使用在临床小规模体检以及流行病学调查时,没有出现明显的高阳性率,基本与之前文献报道相符合,很适合临床应用于常规患者样本检测和流行病学调查,是目前较为理想的实验室检测工具。