论文部分内容阅读
目的:JAK2V617F基因突变在骨髓增殖性肿瘤(MPN)患者中的发生率较高,目前其主要的方法是应用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测其突变负荷,但不能达到绝对定量。2016年WHO新的诊断标准将pre-PMF从PMF中分开,成为一个新的病种,但其诊断复杂,主要依据骨髓活检中的巨核细胞形态,并且不易与ET进行鉴别诊断。本研究旨在利用微滴式数字PCR(ddPCR)定量检测ET、PV与PMF中JAK2V617F的突变负荷,为三者的鉴别诊断提供新的实验室依据。方法:1、采用基于MGB探针的微滴式数字PCR(ddPCR)技术,在DNA水平定量检测149例MPN患者JAK2V617F的突变负荷,比较ET、PV、PMF各组之间的差别。2、根据2016年WHO关于MPN的诊断标准,结合骨髓活检的结果,对所有MPN患者进行重新诊断。筛选符合诊断标准的ET、PV、pre-PMF患者,对他们的JAK2V617F的突变负荷进行比较。3、根据2016年WHO关于MPN的诊断标准和JAK2V617F的突变负荷的不同,对不确定型MPN重新诊断。结果:1.整理并收集从2013年11月至2017年10月在山西医科大学第二医院就诊的只有JAK2V617F突变阳性的MPN患者149例,根据2008年WHO诊断标准,所收集病例中有ET患者86例,PV患者27例,PMF患者19例,不确定型MPN17例。2.按照2008年的MPN诊断标准,应用ddPCR对诊断明确的132个病例进行JAK2V617F突变负荷定量检测,包括86例ET,27例PV,以及19例PMF。三组患者中,JAK2V617F突变负荷的均值分别为:ET组31.68±19.70,PV组83.44±6.77,PMF组59.47±26.10。ET组与PV组、ET组与PMF组之间存在差异,具有统计学意义,p<0.001。而PV组与PMF组之间没有统计学差异,p=0.68。利用ROC曲线统计方法分析得到PV组与ET组JAK2V617F突变负荷Cut-off值为54.7。3.严格按照2016年WHO的诊断标准,对所有收集到的病例重新进行诊断,符合诊断标准的病例有44例,ET组26例,PV组11例,pre-PMF组7例,JAK2V617F突变负荷的均值分别为:ET组26.33±9.49,PV组81.87±5.95,pre-PMF组68.33±14.06。ET组与PV组、ET组与pre-PMF组之间存在差异,具有统计学差异,p<0.001,PV组与pre-PMF组之间没有统计学差异,p=0.1。4.对17例患者的JAK2V617F突变负荷进行分析,得出5例<54.7%,12例>54.7%。根据骨髓形态及随访资料对17例患者重新诊断,5例负荷<54.7%的患者确诊为ET,12例中负荷>54.7%的患者中10例确诊为PV,2例确诊为pre-PMF。结论:1.建立了一种基于ddPCR技术对JAK2V617F突变负荷检测的新方法。2.应用ddPCR技术对JAK2V617F突变负荷进行绝对定量检测,可以对PV、ET、PMF及不典型MPN的鉴别诊断提供有力地实验室依据,JAK2V617F突变负荷可以作为其辅助诊断指标。3.对于ET和pre-PMF患者的鉴别诊断,可以以50%JAK2V617F突变负荷为诊断参考,JAK2V617F突变负荷≥50%时,诊断为pre-PMF;JAK2V617F突变负荷<50%时,诊断为ET。