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目的:本实验通过构建携带有NM23基因的重组腺病毒载体并加以鉴定,包装腺病毒并感染人胃癌细胞株BGC-823,观察其对人胃癌细胞株BGC-823细胞凋亡的影响,从而建立表达NM23基因的人胃癌细胞株BGC-823。方法:(1)以质粒NM23-PIRES2-EGFP为模版,采用PCR法扩增出NM23基因,克隆至腺病毒载体p CMV-MCS-IRES-EGFP上,形成重组腺病毒载体p CMV-NM23-IRES-EGFP并酶切鉴定及基因测序;(2)包装病毒并检测其滴度,确定腺病毒感染人胃癌细胞株BGC-823的最佳MOI值。(3)将人胃癌细胞株BGC-823分为实验组(NM23-OE组,感染p CMV-NM23-IRES-EGFP)、空白组(Ctrl组),阴性对照组(NC组,感染p CMV-MCS-IRES-EGFP);(4)分别用Real Time PCR和Western Blot检测3组细胞中NM23基因m RNA和蛋白表达;(5)通过流式细胞仪检测3组胃癌细胞株BGC-823的凋亡率。结果:(1)经酶切鉴定和基因测序证实成功构建重组腺病毒p CMV-NM23-IRES-EGFP;(2)经扩增后,重组腺病毒的滴度为4.0x1010ifu/m L;(3)Real Time PCR和Western Blot结果显示:阴性对照组与空白组相比差异无统计学意义(P>0.05),而实验组的NM23的m RNA和蛋白表达显著高于其他两组(P<0.05);(4)实验组BGC-823细胞的凋亡率也显著高于其他两组(P<0.05)。结论:(1)成功构建了过表达NM23基因的重组腺病毒p CMV-NM23-IRES-EGFP载体;(2)成功构建了腺病毒介导的表达NM23基因的人胃癌细胞株BGC-823;(3)通过上调NM23基因的表达,可观察到胃癌细胞株BGC-823的凋亡水平有明显升高。