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与脊椎动物相似，昆虫在进化中形成强大的免疫系统，包括先天免疫系统和获得性免疫系统，由于缺乏对昆虫获得性免疫的认知，目前的研究主要针对昆虫的先天免疫系统。昆虫的先天免疫系统主要包括三个通路：Toll通路、Imd通路和JAS/STAT通路。荒漠昆虫在极端环境中进化形成了独特的免疫抗菌适应机制，本研究以准噶尔荒漠广布的光滑鳖甲为研究对象，构建细菌诱导的抑制差减cDNA文库，筛选免疫抗菌相关的蛋白基因，这将对揭示光滑鳖甲的免疫适应机制和发展荒漠昆虫的免疫调控系统奠定理论基础。本研究首先根据实验室已建立的光滑鳖甲饲养体系，培养出1～6龄幼虫，观察各龄期昆虫的形态及体重特征。经抑菌实验分析，确定了诱导条件：取光滑鳖甲5龄幼虫为实验材料，体重0.1～0.2g，将大肠杆菌与金黄色葡萄球菌分别培养12h，微量注射器取10μL混合菌液（1:1混合）注射于幼虫侧腹部第三节处，30℃培养16h。根据光滑鳖甲幼虫脂肪含量、角质等多糖含量确定不同实验方案提取RNA，采用TRIzol法提取总RNA，获得总RNA的OD260/280为2.0，终浓度为2.128μg·μL-1，电泳检测完整的RNA。Oligotex mRNA Kits试剂盒纯化获得光滑鳖甲mRNA，通过抑制差减杂交技术获得光滑鳖甲的差减cDNA文库，蓝白斑、PCR、地高辛筛选阳性克隆，最终获得70个长度在250～750bp的ESTs序列。根据表达量的改变方向分为正向文库和反向文库两部分，进行功能分类后发现所获得的基因涉及生物调节，细胞致死，细胞分子、组织构成、生物进化，细胞过程，免疫系统过程，代谢过程，多生物体过程，刺激应答等过程，其中刺激应答和多生物体过程涉及蛋白相对丰富，分析结果提示，昆虫的免疫应答过程往往与一些环境因素的应答同时发生，两种系统相互影响。选取正向文库中的抗菌肽和肽聚糖识别蛋白基因ESTs序列进行全长扩增，在5’-RACE和3’-RACE的PCR扩增基础上，克隆获得抗菌肽基因AMPFA85全长，对测序正确的全长序列进行生物信息学分析，预测所得抗菌肽为cecropin类抗菌肽，分子量为16.6kDa，生理pH下呈碱性，带有3个单位的正电荷，序列中含有16个甘氨酸，二级结构中包含一个α-螺旋和5个β-折叠，C-端疏水、N-端亲水。总之，本研究进一步完善了光滑鳖甲饲养体系，确定了细菌免疫诱导光滑鳖甲的诱导条件，构建了光滑鳖甲抑制差减cDNA文库，对文库中表达的基因进行功能注释，分析了具有特定功能的蛋白，表明光滑鳖甲经细菌诱导后将激活Toll通路和酚氧化酶原级联反应；克隆获得了cecropin类抗菌肽AMPFA85基因，并对所得抗菌肽结构与功能进行了预测，AMPFA85基因的表达与活性分析有待进一步研究。