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背景和目的EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)又称人类疱疹病毒4型,世界上有超过90%的健康成人为EBV携带者,其感染与人类多种淋巴细胞和上皮细胞性肿瘤有关。EBV的免疫逃逸可能通过抑制机体对EBV转化细胞的清除,而参与了EBV相关肿瘤的发生。BNLF2a是EBV早期基因,可干扰抗原提呈相关转运蛋白的抗原肽转运而发挥免疫逃逸作用。研究表明,来自不同地区的EBV毒株在多种基因位点表现出不同的基因多态性,同时其相关肿瘤呈人群和地域倾向性分布,因此是否存在与EBV相关肿瘤有关的EBV基因变异一直备受关注。本研究选择我国广东地区(鼻咽癌高发区)和山东地区(鼻咽癌非高发区)EBV阳性淋巴瘤、胃癌、鼻咽癌和健康人群作为研究对象,对BNLF2a基因的多态性进行检测分析,旨在探讨BNLF2a基因的多态性及其分布特征,为阐明EBV BNLF2a基因变异与EBV相关肿瘤发生的关系提供理论依据。方法聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)结合DNA测序检测EBV阳性淋巴瘤、胃癌、鼻咽癌和健康人咽漱液标本中BNLF2a基因的多态性,应用DNAStar软件对序列进行对比分析,并与EBV标准株B95-8进行比对。根据测序结果将各序列进行标准化处理,DNAStar软件生成系统发生树,根据系统发生树和共有突变对各种基因变异进行分类。比较山东和广东地区EBV相关淋巴瘤、胃癌、鼻咽癌和健康人群中BNLF2a各基因型的分布,并与以往文献发表的相关数据进行比较和分析。结果(1)共408例标本成功进行PCR扩增及测序,根据测序结果及系统发生树,所有标本可以分为BNLF2a-A和BNLF2a-B两种类型。(2)BNLF2a-A型为主要基因型,见于374例标本,有16例标本发现新的共有突变(167415nt g→a)。(3)BNLF2a-B型为次要基因型,见于34例标本,共鉴定出2个共有突变,分别为A8T和R40K。(4)统计学分析结果显示,BNLF2a-A型在广东地区咽漱液和EBV相关肿瘤中的检出率分别高于山东地区咽漱液和EBV相关肿瘤(TW:P<0.001;EBV相关肿瘤:P=0.002)。BNLF2a-A型在广东鼻咽癌中的检出率显著高于山东鼻咽癌(P<0.05),而在淋巴瘤和胃癌中则两地区无显著性差异。(5)BNLF2a基因型在山东地区4组人群中的分布有显著性差异(P<0.001),在广东地区4组人群中则无显著性差异。BNLF2a-B型在山东健康人咽漱液中的检出率显著高于3种EBV相关肿瘤(P<0.05),而BNLF2a基因型分布在山东地区各肿瘤间无显著性差异(P>0.05)。结论(1)BNLF2a基因高度保守,BNLF2a-A型是我国的主要亚型。(2)在EBV相关肿瘤和健康人群中,广东地区BNLF2a-A型所占比率均显著高于山东地区,BNLF2a基因的多态性分布具有地域特异性。(3)BNLF2a-A基因型在山东地区EBV阳性淋巴瘤、胃癌、鼻咽癌中所占比率显著高于健康人群,推测BNLF2a-A变异型可能与EBV相关肿瘤的发生有关。