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目的:探讨SD大鼠骨髓间充质干细胞(rat bone marrow mesenchymal stem cells,rBMSCs)中RNF213基因对VEGF、bFGF、TGF-β1、MMP-9基因表达的影响,明确RNF213基因量变在烟雾病发病过程中的作用。内容:收集济宁医学院附属医院神经外科和神经内科2014年9月至2015年4月间入院的烟雾病患者以及体检中心健康人的血清,用Elisa方法分别检测烟雾病患者组以及健康人对照组血清中VEGF、bFGF、TGF-β1、MMP-9的含量,比较两组间相关因子含量的差异。分离、培养SD大鼠骨髓间充质干细胞以达到纯化的目的,应用流式细胞术和成骨、成脂诱导分化进行鉴定。分别将RNF213-shRNA和Negative-shRNA慢病毒重组质粒转染第3代rBMSCs,通过RT-qPCR技术检测RNF213-shRNA对VEGF、bFGF、TGF-β1、MMP-9 mRNA表达的影响。方法:通过酶联免疫吸附实验(Elisa)方法检测烟雾病组和健康人对照组血清中VEGF、bFGF、TGF-β1、MMP-9的含量,用SPSS19.0分析两者血清中VEGF、bFGF、TGF-β1、MMP-9表达量的差异。应用全骨髓贴壁法分离、培养rBMSCs进行纯化,并通过流式细胞术和成骨、成脂方向诱导分化对纯化后的第3代rBMSCs进行鉴定。选用第3代rBMSCs作为细胞实验对象,分别将RNF213-shRNA和Negative-shRNA慢病毒重组质粒对第3代细胞进行转染,将实验分为A组(转染RNF213-shRNA慢病毒的rBMSCs组)、B组(转染Negative-shRNA慢病毒的rBMSCs组)、C组(未转染的rBMSCs组),应用RT-qPCR技术检测慢病毒的转染效率以及三组rBMSCs转染慢病毒7天和15天时VEGF、bFGF、TGF-β1、MMP-9 mRNA的表达情况。结果:1.与健康人对照组相比,烟雾病组血清中VEGF、bFGF、TGF-β1、MMP-9的表达水平均明显升高,两组间差别具有统计学意义(P<0.05)。2.分离纯化的第3代rBMSCs细胞表面高表达CD90(95.15%)和CD44(99.23%),低表达CD45(0.74%)。成骨诱导21天后,用茜素红进行染色,可见明显的红色致密钙化结节;成脂诱导14天后,用油红O进行染色,可见胞内大量红色脂滴形成。3.RNF213-shRNA慢病毒转染效率鉴定结果显示:相对于C组(未转染rBMSCs组),A组、B组RNF213 mRNA的相对表达量分别为0.028±0.002、0.976±0.021,两组之间相对表达量的差别具有统计学意义(P<0.01)。4.转染后第7天RT-qPCR结果显示:相对于C组,A组、B组VEGF mRNA的相对表达量分别为0.915±0.112、0.949±0.012,两组之间相对表达量的差别无统计学意义(P>0.05);A组、B组bFGF mRNA的相对表达量分别为0.964±0.023、0.958±0.035,两组之间相对表达量的差别无统计学意义(P>0.05);A组、B组TGF-β1mRNA的相对表达量分别为3.269±0.968、0.996±0.005,两组之间相对表达量的差别具有统计学意义(P<0.01);A组、B组MMP-9 mRNA的相对表达量分别为3.147±0.320、0.946±0.052,两组之间相对表达量的差别具有统计学意义(P<0.01)。5.转染后第14天RT-qPCR结果显示:相对于C组,A组、B组VEGF mRNA的相对表达量分别为0.973±0.019、0.966±0.026,两组之间相对表达量的差别无统计学意义(P>0.05);A组、B组bFGF mRNA的相对表达量分别为1.582±0.272、0.966±0.039,两组之间相对表达量的差别具有统计学意义(P<0.01);A组、B组TGF-β1 mRNA的相对表达量分别为2.370±0.068、0.974±0.019,两组之间相对表达量的差别具有统计学意义(P<0.01);A组、B组MMP-9 mRNA的相对表达量分别为2.741±0.374、0.976±0.044,两组之间相对表达量的差别具有统计学意义(P<0.01)。结论:1.相对于健康人对照组,烟雾病组血清中VEGF、bFGF、TGF-β1、MMP-9的表达水平均明显升高,说明VEGF、bFGF、TGF-β1、MMP-9在烟雾病的发生发展过程中可能发挥了重要作用。2.利用全骨髓贴壁法可成功分离SD大鼠骨髓间充质干细胞,第3代细胞可作为后续细胞实验良好的种子细胞。3.RNF213-shRNA可有效抑制rBMSCs中RNF213基因的表达,RNF213基因的低表达可诱导bFGF、TGF-β1、MMP-9基因的高表达。4.RNF213基因可能通过某种基因通路影响bFGF、TGF-β1、MMP-9基因的表达,从而使烟雾病患者体内bFGF、TGF-β1、MMP-9表达异常,说明RNF213基因量变在烟雾病发生发展过程中可能发挥了重要作用。