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研究背景多发性硬化（multiple sclerosis,MS）是一种由自身免疫所介导的神经退行性疾病,以中枢神经系统（central nervous system,CNS）炎性浸润和髓鞘脱失为主要病理特征。MS是导致中青年神经性残疾的重要因素之一,因治疗困难为众多家庭和国家带来了沉重的负担。实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE）是MS的经典动物模型,此模型为MS发病机制研究和治疗药物的开发提供了重要依据。异甘草素（isoliquiritigenin,ILG）是一种从古老植物药甘草的根茎中分离提纯的类黄酮化合物,具有抗炎、抗氧化、神经保护、免疫调节等多种药理作用,在已有动物实验研究中,ILG不仅能抑制LPS诱导的炎症,还对阿尔兹海默症（alzheimer’s disease,AD）等中枢神经退行性病变有治疗作用。研究目的本研究旨在利用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55（myelin oligodendrocyte glycoprotein,MOG35-55）肽段主动免疫的EAE模型探究ILG对EAE的治疗效果,为该药物能否用于MS临床转化提供实验依据。研究方法本实验使用雌性6-8周龄的C57BL/6小鼠,采用MOG35-55皮下颈、背两点注射联合百日咳毒素（pertussis toxin,PT）腹腔注射的方法成功构建了 EAE动物模型。实验鼠随机分为3组,10只/组。EAE+ILGprevent组于造模后第二天开始灌胃给药（ILG 20 mg/kg,隔天进行）,EAE+ILGtreatment组于临床行为学评分0.5-1分时开始以同样的方式和剂量给药,EAE+Vehicle组给予等体积含2%DMSO的PBS。两名观察者每人每日在固定时间点进行临床行为学评分,直至小鼠处死。取小鼠脊髓组织进行苏木素-伊红（hematoxylin-eosin,H&E）染色和快蓝（luxol fast blue,LFB）染色,以评价其炎性细胞浸润和髓鞘脱失情况;利用流式细胞术检测各组小鼠CNS和外周Th 1、Th 17、Treg细胞亚群比例变化;通过组织免疫荧光染色评价ILG对EAE小鼠CNS星形胶质细胞和小胶质细胞的影响;并进行体外细胞实验进一步探究ILG和Th 1细胞之间以及ILG和星形胶质细胞间作用关系。研究结果（1）与EAE+Vehicle组相比,ILG干预后临床行为评分（p<0.01 VS p<0.001）,累计临床行为评分（p<0.05 VS p<0.01）和最大日平均分（p<0.05 VS p<0.001）均显著降低,且EAE+ILGprevent组效果更优。（2）H&E染色结果显示EAE+ILGprevent组CNS炎性细胞浸润程度降低（p<0.001）;LFB染色结果显示EAE+ILGprevent组的髓鞘脱失程度要明显低于EAE+Vehicle 组（p<0.001）。（3）流式细胞术分析结果显示:与EAE+Vehicle组相比,在CNS中,EAE+ILGprevent 组的 CD 4+IFN-γ+Th 1 细胞比例明显下降（p<0.01）,CD 4+IL-17 A+Th 17细胞比例升高（p<0.05）,CD 4+CD 25+Treg细胞比例有上升趋势,但无显著性差异。在外周中,CD4+IFN-γ+Th 1细胞比例明显下降（p<0.01）,CD 4+IL-17 A+Th 17细胞比例有上升趋势,但无显著性差异。CD 4+CD 25+Treg细胞比例有上升趋势,但无显著性差异。（4）在Th1极化条件下给予ILG处理,发现ILG干预24小时后不影响Th1细胞的凋亡,但可剂量依赖性抑制Th 1细胞的分化和增殖。（5）免疫荧光染色结果表明:在动物实验中给予ILG的预防性干预可促进EAE小鼠CNS的小胶质细胞和星形胶质细胞活化（p<0.01）,在星形胶质细胞的体外实验中进行细胞免疫荧光染色发现ILG对于星形胶质细胞的活化是通过细胞间相互作用的方式实现,并且ILG间接作用可促进“反应性星形胶质细胞”GFAP的表达且呈剂量依赖性。研究结论（1）ILG预防性干预可以有效缓解EAE病情严重程度,减少CNS炎性细胞浸润和髓鞘脱失程度。（2）ILG可显著降低EAE小鼠CNS及外周Th 1细胞比例。（3）在体外实验中ILG可抑制Th1细胞的分化和增殖。（4）ILG可通过间接作用激活CNS“反应性星形胶质细胞”并调节其GFAP表达。