细胞外基质(ECM)是存在于细胞与细胞之间的动态网状结构,由胶原、蛋白多糖、糖蛋白、糖胺多糖和弹力纤维等五大类物质组成。细胞外基质广泛存在于机体各组织、器官中。细胞外基质不仅起细胞与细胞之间的机械支持和连接作用,也是细胞和细胞之间信号传递的桥梁。细胞外基质降解酶系至少有六大类:脯肽酶、丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬酰胺蛋白酶、糖苷酶、基质金属蛋白酶(MMP)。其中基质金属蛋白酶是降解细胞外基质成分最重要的酶。基质金属蛋白酶是由细胞分泌的Zn2+金属内肽酶的总称,参与许多基质成分的降解。在正常和病理情况下,MMP具有广泛的蛋白水解作用。在肿瘤的发生和发展过程中,MMP常过度表达,降解基底膜和细胞外基质,导致肿瘤的侵袭转移及血管形成。因此,以MMP作为治疗靶点设计并寻找针对MMP的拮抗药物,尤其是可选择抑制MMP的药物,是近年来肿瘤治疗的热点。对已构建的MT3-MMP表达系统,我们对其表达条件进行了优化。由于该表达系统,MT3—MMP是以包涵体形式存在,须经过复性过程才能成为有活性的蛋白。我们主要尝试了以下几种复性方法:透析复性,通过尿素浓度梯度透析缓慢去处变性剂,从而使目的蛋白成功复性,透析复性耗时长,所需缓冲液种类多、体积大。凝胶过滤柱复性,通过凝胶柱的分子筛作用使变性剂与蛋白缓慢分离,从而有效抑制了蛋白的聚集。我们使用Sepharose G-75作为复性凝胶介质,对金属螯合层析纯化的MT3-MMP进行了柱上复性研究,较好地实现了包涵体蛋白的复性。金属螯和层析复性,该方法不需要包涵体蛋白的预先纯化,可同时实现纯化和复性,简化了操作步骤,但复性效果不理想,需要进一步摸索。