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目的:食管鳞状细胞癌(Esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)是常见的侵袭性恶性肿瘤,死亡率很高。探索其发生发展的分子机制和寻找新的诊断治疗靶点对ESCC的治疗具有重要意义。研究发现长链非编码RNA(Long non-coding RNA,lncRNA)参与许多疾病的发展,且与肿瘤之间的关系也被越来越多的人所关注,已有大量报道表明lncRNA与多种肿瘤的发生发展、转移侵袭和生存时间紧密相关。近年来研究发现ESCC的发生也受到多种lncRNA的调控。本课题研究了lncRNA LINC01137在ESCC中的表达及在ESCC细胞生长、迁移和侵袭中的作用。结果发现LINC01137在ESCC中表达显著上调,且在ESCC细胞系中表达明显高于正常食管鳞状上皮细胞系,其表达升高提示LINC01137可能在ESCC的发生发展中发挥作用。我们应用小干扰RNA(Small interfering RNA,siRNA)敲低ESCC细胞中LINC01137的表达,并分析下调LINC01137对ESCC细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。通过研究LINC01137在ESCC中的表达及其在调控ESCC细胞的增殖、迁移和侵袭中的作用,为揭示ESCC的发生、进展机制及寻找新的治疗靶点提供理论依据。方法:1.应用RT-qPCR方法检测LINC01137在10例ESCC组织及邻近癌旁组织中的表达,同时检测LINC01137在1种正常食管鳞状上皮细胞系(Het-1a)和4种ESCC细胞系(Eca109,Kyse130,Kyse150,Kysete1)中的表达。2.设计靶向LINC01137的两个siRNA,转染ESCC细胞,敲低LINC01137的表达。3.应用CCK-8实验、集落形成实验分析下调LINC01137的表达对ESCC细胞增殖能力的影响。4.应用Transwell实验研究敲低LINC01137的表达对ESCC细胞迁移和侵袭能力的影响。5.应用Western Blot实验检测敲低LINC01137的表达后对增殖和EMT相关蛋白的影响。6.应用细胞胞浆胞核分离实验检测LINC01137在ESCC细胞中的定位。结果:1.LINC01137在ESCC组织中的表达采用RT-qPCR实验方法,检测LINC01137在10例ESCC组织和癌旁正常食管组织中的表达,结果发现LINC01137在其中9例ESCC组织中的表达明显高于癌旁正常组织,具有统计学意义(P<0.01)。2.LINC01137在ESCC细胞系中的表达采用RT-qPCR实验方法,检测LINC01137在1种正常食管鳞状上皮细胞系(Het-1a)和4种ESCC细胞系(Eca109,Kyse130,Kys150,Kysete1)中的表达,结果显示LINC01137在ESCC细胞系的表达明显高于正常食管鳞状上皮细胞系,具有统计学意义(P<0.01)。同时我们发现LINC01137在ESCC细胞Eca109和Kyse130中表达相对较高,因此,后期实验我们选用Eca109和Kyse130细胞系进行。3.构建siRNA敲低LINC01137的表达我们设计两对靶向LINC01137的siRNA(siLINC01137-1和siLINC01137-2)来下调ESCC细胞Eca109和Kyse130中LINC01137的表达,转染48小时后收集细胞,提取总RNA,采用RT-qPCR方法检测敲低效率,结果显示与对照组相比,转染siLINC01137-1和siLINC01137-2组都能使LINC01137表达下降超过50%(P<0.01),表明这两个靶向LINC01137的siRNA均可显著敲低LINC01137的表达。4.敲低LINC01137对ESCC细胞增殖、迁移和侵袭的影响在ESCC细胞Eca109和Kyse130中,转染siLINC01137-1和siLINC01137-2,敲低LINC01137表达后进行CCK-8增殖实验,集落形成实验,Transwell迁移侵袭实验,结果显示,与对照组相比,下调LINC01137的表达明显抑制ESCC细胞Eca109和Kyse130的增殖、迁移和侵袭能力,并具有显著统计学差异(P<0.05)。5.采用Western Blot实验方法检测敲低LINC01137表达后增殖及EMT相关蛋白的变化。在ESCC细胞Eca109和Kyse130中转染siLINC01137-1和siLINC01137-2,培养48小时后分别提取总蛋白,应用Western Blot实验检测下调LINC01137表达后增殖及EMT相关蛋白的表达变化,结果显示,与对照组相比,实验组增殖相关蛋白CyclinD1和Survivin表达明显下降,且EMT相关蛋白Snail、Vimentin及Mmp9表达也明显下降。6.LINC01137在ESCC细胞中的定位采用胞浆胞核分离方法,使ESCC细胞Eca109和Kyse130的胞浆和胞核成分相互分离,再分别提取总RNA,应用RT-qPCR方法分别检测LINC01137在胞浆和胞核中的表达。结果发现,在这两种细胞中LINC01137在胞浆中的表达均显著高于胞核中的表达,表明LINC01137主要定位在细胞胞浆。结论:LINC01137在ESCC组织中表达明显高于癌旁正常食管组织,在ESCC细胞系中的表达同样明显高于正常食管鳞状上皮细胞系。敲低LINC01137的表达显著抑制ESCC细胞的增殖、迁移、侵袭能力,并且能够明显降低细胞增殖、EMT相关蛋白的表达。