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目的:寨卡病毒具有嗜神经性和致畸性,妊娠期间感染病毒可能导致新生儿小头畸形,也可引起格林巴利综合征严重危害人类健康[1-3]。但目前尚无预防和治疗寨卡病毒感染的特效药,亟需开发安全有效的抗病毒药物。近年来通过抗病毒药物研究发现,天然植物来源的药物在抗病毒中具有极大优势,为此本课题主要通过体内和体外实验研究植物石蒜中石蒜碱对寨卡病毒的抗病毒作用及其机制研究。方法:1、石蒜提取物抗寨卡病毒活性研究寨卡病毒感染Vero细胞48h,使用荧光定量PCR（qRT-PCR）检测细胞中的病毒RNA（vRNA）含量,验证石蒜提取物的抗病毒活性。2、石蒜碱体外抗寨卡病毒活性研究寨卡病毒感染Vero、Huh7、A549细胞48h,使用qRT-PCR检测细胞中的病毒RNA含量;通过蛋白免疫印迹法（Western blot）和免疫荧光实验检测石蒜碱对寨卡病毒蛋白的影响,并结合空斑实验检测石蒜碱对子代病毒数量的影响,从而验证石蒜碱的抗病毒活性。3、石蒜碱抑制寨卡病毒复制的机制研究细胞感染病毒后在不同时间（-2,0,1,2,4,6,10 hpi）加药,分别使用qRT-PCR检测细胞内的病毒RNA水平、空斑法检测子代病毒数目和蛋白免疫印迹法检测病毒蛋白的表达,验证石蒜碱对寨卡病毒复制阶段的的影响。细胞感染病毒后加药并在不同时间（6,9,12,15,18,21,24 hpi）以及（12,18,36 hpi）撤药,使用qRT-PCR检测细胞内的病毒RNA含量和以病毒E,NS5蛋白为指标,通过检测病毒蛋白的表达,以表明石蒜碱对病毒基因组复制的影响。qRT-PCR用于检测病毒RNA正负链含量,证明石蒜碱对病毒RNA正负链的影响。进行细胞热转变分析实验（CETSA）阐明石蒜碱与寨卡病毒NS5蛋白的相互作用。通过体外RNA依赖RNA聚合酶（Rd Rp）实验,检测Rd Rp活性,以阐明石蒜碱对Rd Rp活性的影响。采用Autodock软件分子对接技术对石蒜碱与Rd Rp进行分子对接预测,说明石蒜碱与Rd Rp的可能结合位点。4、石蒜碱在寨卡病毒感染小鼠中的抗病毒活性研究采用足垫注射病毒感染AG6小鼠构建模型,每天灌胃高中低剂量的石蒜碱治疗14天,设置空白对照组和病毒组,实验过程中观察体重变化和存活率,并在病毒感染第1、3天眼底静脉丛取血检测血液中病毒RNA含量以及检测脑和肝组织中的病毒RNA含量。结果:1.采用qRT-PCR证明石蒜提物呈剂量依赖抑制细胞中病毒RNA含量,具有抗寨卡病毒活性。2.石蒜碱体外抗寨卡病毒活性研究（1）石蒜碱在Vero,A549,Huh7细胞中的CC50分别为21,5.39,27.4μM。（2）石蒜碱在Vero,A549,Huh7细胞中的EC50分别为0.39,0.35,0.24μM。（3）根据免疫荧光实验和蛋白免疫印迹实验结果可知石蒜碱抑制寨卡病毒蛋白的形成,当浓度大于5μM时完全抑制病毒蛋白的形成。（4）空斑实验结果表明石蒜碱抑制子代病毒的形成,当浓度大于1.75μM时无空斑形成。3.石蒜碱抗寨卡病毒机制研究（1）由不同时间给药实验可知石蒜碱作用于病毒感染后期。（2）在病毒感染6h加石蒜碱抑制病毒RNA复制和蛋白质形成,感染24h加石蒜碱不抑制病毒RNA复制和蛋白质形成,表明石蒜碱抑制寨卡病毒基因组的复制。（3）采用qRT-PCR法检测病毒RNA正负链,在病毒感染48h时正负链抑制率分别为93%和95%,证明石蒜碱抑制病毒RNA正负链的形成。（4）根据CETSA实验结果,加入石蒜碱后NS5 Tagg值从44.6℃增加到47.8℃,增加蛋白稳定性。（5）体外酶活实验证明石蒜碱抑制Rd Rp活性。4.石蒜碱在寨卡病毒感染小鼠中的抗病毒活性研究（1）石蒜碱的高中低剂量组分别提高小鼠存活率83%、66%、33%。（2）石蒜碱降低病毒感染第1、3天血液中病毒RNA。（3）石蒜碱减少脑和肝组织中的病毒RNA含量。结论:本研究发现石蒜碱在体内和体外均具有抗寨卡病毒活性,通过抑制Rd Rp活性抑制寨卡病毒复制,发挥抗寨卡病毒作用。我们的研究证明了石蒜碱抗寨卡病毒活性和抗寨卡病毒机制的初步研究,为石蒜碱作为抗寨卡病毒候选药物提供依据以及为阐明石蒜碱抗寨卡病毒机制提供基础。