玉米赤霉烯酮毒素印迹聚合物的合成及在粮食和饲料分析中的应用

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本文利用分子印迹技术,以玉米赤霉烯酮毒素的结构类似物华法林以及华法林钠为模板,分别采用悬浮聚合、沉淀聚合、表面印迹聚合等不同的合成方法,合成了四类对玉米赤霉烯酮毒素有特异性吸附的分子印迹聚合物。通过单因素以及正交实验,探究了印迹聚合物的合成条件。将所合成的分子印迹聚合物作为柱填料装柱,制备成分子印迹固相萃取柱,用于对粮食和饲料实际样品中的玉米赤霉烯酮毒素进行分离与富集。通过优化柱子的萃取条件,得到了优化的淋洗液以及洗脱液。同时将自制柱与商品化免疫亲和柱对比,开发了一种价廉易得、选择性强的样品前处理方法,并与高效液相联用,建立了一种简便快速、高效灵敏的检测粮食和饲料中玉米赤霉烯酮毒素的分析方法。主要内容为以下两个方面:1.以玉米赤霉烯酮毒素的结构类似物华法林为替代模板,甲基丙烯酸缩水甘油酯为功能单体,分别以二乙烯基苯为悬浮聚合法交联剂、乙二醇二甲基丙烯酸酯为沉淀聚合法交联剂,在引发剂过氧化苯甲酰的作用下,合成了对玉米赤霉烯酮毒素有特异性吸附的印迹聚合物。通过单因素以及正交实验,确定了悬浮和沉淀聚合的合成条件。将悬浮聚合产物(S-MIPs)和沉淀聚合产物(P-MIPs)装柱,制备成分子印迹固相萃取柱。通过固相萃取条件优化实验,得到了 S-MIPs柱和P-MIPs柱的淋洗液、洗脱液种类以及洗脱体积。所建方法的线性范围为8-200 ng mL-1,最低检出限为1.25 ng mL-1,定量限为5 ngmL-1。加标回收实验结果表明,在10-170ng g-1范围内,S-MIPs柱和P-MIPs柱的回收率分别为72.16-95.23%和79.21-103.74%,相对标准偏差分别为1.41-7.87%和2.19-4.48%。在处理实际样品过程中,结果表明,S-MIPs柱和P-MIPs柱的效果要优于免疫亲和柱,P-MIPs柱优于S-MIPs柱,印迹柱的效果优于非印迹柱。2.结合片段印迹以及表面印迹技术,采用沉淀聚合,以玉米赤霉烯酮的结构类似物华法林钠为替代模板,甲基丙烯酸和甲基丙烯酸缩水甘油酯为混合单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂,偶氮二异丁腈为引发剂,无水乙醇为溶剂,合成了对玉米赤霉烯酮毒素有选择特异性吸附的传统分子印迹聚合物以及结合载体材料的表面印迹聚合物。通过单因素以及正交实验,探究了传统分子印迹聚合物(MIPs)和磁性表面印迹聚合物(MHNTs@MIPs)的优化合成条件。将MIPs和MHNTs@MIPs装柱,制备成分子印迹固相萃取柱。固相萃取条件的优化得到了 MIPs柱和MHNTs@MIPs柱的淋洗液、洗脱液种类以及洗脱体积。加标回收实验结果表明,在10-170 ng g-1范围内,MIPs柱和MHNTs@MIPs柱的回收率分别为74.75-102.37%和79.96-104.23%,相对标准偏差分别为2.75-6.66%和2.35-6.27%。MIPs柱的线性范围为20-800 ng mL-1,最低检出限为3 ng mL-1,定量限为8ngmL-1;MHNTs@MIPs柱的线性范围为10-1000ngmL-1,最低检出限为2.5ngmL-1,定量限为8ngmL-1。在处理实际样品过程中,结果显示,MHNTs@MIPs柱的效果要优于MIPs柱和免疫亲和柱。在河南海瑞正检测技术有限公司使用自制柱对粮食以及饲料实际样品进行样品前处理并测定其玉米赤霉烯酮毒素的含量,测定结果表明,所制得的固相萃取柱达到了预期效果,为接下来进入大规模的商用提供了可能性。
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