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近年来，伴随着养殖业的快速规模化发展，猪呼吸与繁殖障碍疾病已成为影响养猪业健康发展最重要疾病之一。猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type2, PCV2）、猪细小病毒（Porcine parvovirus, PPV）、伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus, PRV）、猪繁殖与呼吸综合症病毒（Porcine productive and respiratory syndrome virus, PRRSV）、猪瘟病毒（Classical swine fever virus, CSFV）、日本脑炎病毒（Japanese encephalitis virus, JEV）是引起猪呼吸和繁殖障碍疾病的主要病原，它们常常呈混合感染，病情十分复杂，死亡率高，造成的经济损失严重。因此，能对多种猪病毒的快速检测具有重要意义。本研究建立的一种基于Taqman多重实时荧光定量PCR方法，可有效检测出这六种病毒。 本研究首先建立了六种猪病毒的单重实时荧光定量 PCR体系，PCV2，PPV，PRV，PRRSV，CSFV和JEV这六种猪病毒的扩增效率分别达到98％，99%，93%，97%，97%和95%；各单重实时荧光定量PCR对非靶病毒均无非特异性扩增，对六种病毒的检测灵敏度均为5 copies/μL，批内重复和批间重复的变异系数分别小于3%和5%。结果表明建立的六种病毒单重实时荧光PCR方法具有较好的特异性、灵敏性和重复性。 在建立了六种病毒单重实时荧光定量PCR方法的基础上，进一步建立了可同时检测三种DNA病毒样本即PCV2、PPV、PRV和同时检测三种RNA病毒样本即PRRSV、CSFV、JEV的两组多重实时荧光定量PCR方法。多重实时荧光定量PCR的PCV2，PPV，PRV，PRRSV，JEV和CSFV扩增效率分别达到98%，99%，99%，99%，94%和99%；多重实时荧光定量PCR特异性试验显示非目标病毒均无特异性扩增，PCV2，PRV，CSFV和PRRSV的灵敏度为10 copies/μL，PPV和JEV的灵敏度为100 copies/μL，批内重复和批间重复的变异系数均小于3%和5%。实验结果表明，建立的多重实时荧光定量 PCR方法具有较好的特异性、灵敏性和重复性。 应用建立的多重实时荧光定量 PCR方法对118个样品进行检测，阳性检出率达到38.1%，要稍高于普通PCR的检出阳性率37.3%。多重实时荧光定量PCR检测出了25份PCV2，24份PRRSV，9份PPV和3份PRV阳性样品，其中10份是PCV2和PRRSV混合感染，3份PCV2和PPV混合感染，3份为PCV2、PPV和PRV混合感染。对样品的有效检测表明建立的多重荧光定量 PCR方法可满足实际检测要求，具有较好的实际应用价值，适用于猪呼吸与繁殖障碍性疾病病原的快速检测。